?MQAE 氯离子荧光探针（蓝色） 是目前应用最广泛的新型氯离子荧光探针。与 SPQ（一种典型的氯离子指示剂，Ksv = 118 M-1）相比，MQAE 氯离子荧光探针（蓝色） 对氯离子更敏感（Ksv = 200 M-1），并且荧光量子产率也更高。MQAE 氯离子荧光探针（蓝色） 以溴离子为配对阴离子，最大激发波长约为 350 nm，最大发射波长约为 460 nm。当氯离子浓度升高时，MQAE 氯离子荧光探针（蓝色） 的荧光强度随着氯离子浓度的增加而成比例地减少。在氯离子浓度低于 50 mM 时，MQAE 氯离子荧光探针（蓝色） 的荧光强度几乎不受 pH 变化的影响。

MQAE（N-(Ethoxycarbonylmethyl)-6-methoxyquinolinium bromide）是专为细胞内氯离子（Cl?）检测设计的蓝色荧光探针，核心优势源于Cl?依赖性荧光猝灭机制、高离子特异性及低细胞毒性，可实时监测活细胞内游离 Cl?浓度变化，尤其适合氯离子稳态研究、上皮细胞转运功能分析及离子通道药物筛选。

一、核心优势：Cl?特异性响应与检测机制独特性

Cl?介导的荧光猝灭，直接反映离子浓度

MQAE 为脂溶性小分子探针（分子量≈312 Da），可自由穿透活细胞膜；进入细胞后，不依赖酶解激活，直接通过碰撞猝灭机制与游离 Cl?相互作用 ——Cl?浓度越高，荧光猝灭越强，荧光强度与 Cl?浓度呈负相关（检测范围 5-100 mM，适配细胞内生理 Cl?浓度：胞质≈10-40 mM，溶酶体≈40-80 mM）。

对 Cl?特异性极高：对其他生理阴离子（如 HCO??、SO?2?）的猝灭效应仅为 Cl?的 1/10 以下，对阳离子（如 Na?、K?、Ca2?）无响应，无需额外屏蔽其他离子干扰，避免假阳性结果。

蓝色荧光信号，适配多色实验联用

激发 / 发射波长约 358/460 nm，属于蓝色荧光波段，与绿色、红色荧光探针（如 Fluo-4 AM、MitoBright CMXRos）光谱分离度高，串扰率＜1%，可构建 “Cl?+ 其他离子 / 细胞器” 的多维度检测体系（如同步监测 Cl?浓度与线粒体膜电位变化）。

蓝色荧光在细胞自发荧光中占比低（细胞自发荧光主要集中于绿色波段），在活细胞样本中背景噪音低，信噪比可达 25:1 以上，尤其适合低 Cl?浓度（如胞质静息态 Cl?≈10 mM）的检测。

二、活细胞兼容性与操作优势

低毒性，不干扰细胞功能与离子稳态

工作浓度（5-20 μM）下，对细胞活性、增殖及氯离子转运机制无显著影响：

上皮细胞：标记后 Cl?通道（如 CFTR）活性正常，可准确检测上皮屏障的 Cl?分泌功能，无细胞凋亡或代谢紊乱；

神经细胞：不影响神经元的兴奋性与突触传递，可监测神经活动伴随的 Cl?浓度波动（如抑制性突触后电位引发的 Cl?内流）。

无离子螯合或转运干扰：MQAE 仅通过物理猝灭与 Cl?作用，不消耗细胞内 Cl?储备，也不阻断 Cl?转运体 / 通道，检测结果完全反映细胞真实 Cl?稳态。

操作简便，无需复杂预处理

染色流程简单：直接将 MQAE 加入培养基或缓冲液（如 HBSS），37℃孵育 15-30 分钟即可，无需透膜（脂溶性助其跨膜）、洗涤（少量胞外游离探针不影响信号，若需低背景可洗涤 1 次），比免疫荧光标记节省 2-3 小时。

适配多种细胞类型：贴壁细胞（如 Caco-2 肠上皮细胞、HeLa 细胞）、悬浮细胞（如免疫细胞、神经元）、3D 细胞球（如肠道类器官）均适用，3D 样本仅需延长孵育至 40 分钟，确保探针渗透至内部细胞。

三、典型应用场景

氯离子稳态与上皮转运功能研究

肠道上皮 Cl?分泌检测：MQAE 标记 Caco-2 肠上皮细胞，加入 forskolin（激活 CFTR Cl?通道）后，荧光强度升高（Cl?外排导致胞内浓度下降），量化荧光变化幅度（如 20 分钟内升高 30%），评估 CFTR 通道活性，研究囊性纤维化疾病机制。

肾脏远曲小管 Cl?重吸收：标记肾小管上皮细胞，检测醛固酮刺激下的胞内 Cl?变化 —— 醛固酮激活 Cl?转运体，胞内 Cl?浓度从 20 mM 升至 35 mM，荧光强度降低 25%，反映激素对肾脏离子平衡的调控作用。

神经细胞 Cl?信号监测

抑制性突触传递研究：MQAE 标记原代海马神经元，给予 GABA（激活 GABA?受体，引发 Cl?内流）后，胞内 Cl?浓度升高（从 15 mM 升至 30 mM），荧光强度降低 40%，实时捕捉抑制性突触后电位伴随的 Cl?动态变化，分析神经抑制机制。

神经发育 Cl?梯度变化：检测发育中神经元的胞内 Cl?浓度 —— 胚胎期神经元 Cl?浓度高（≈40 mM），成年后降至≈15 mM，荧光强度随发育进程逐渐升高，反映 Cl?稳态与神经成熟的关联。

Cl?通道药物筛选与毒性评估

高通量药物筛选：96 孔板培养表达 CFTR 通道的细胞，加入 MQAE 与候选药物，微孔板 reader 检测荧光强度变化，筛选能激活 CFTR 的药物（如卢卡帕利类似物），通过荧光升高幅度计算药物活性 IC??。

毒性物质检测：重金属（如 Pb2?）处理细胞，MQAE 荧光强度无显著变化（Cl?浓度稳定），而汞（Hg2?）处理后荧光强度降低 30%（Cl?内流异常），可区分不同毒素对 Cl?稳态的影响，评估毒性机制。

四、技术优化与注意事项

浓度与孵育控制

工作浓度：5-10 μM（敏感细胞如神经元）、10-20 μM（常规细胞如 HeLa），避免高浓度（＞30 μM）导致的非特异性荧光或细胞毒性；

孵育条件：37℃、5% CO?孵育 15-30 分钟，贴壁细胞可轻轻摇晃培养皿确保探针均匀接触，悬浮细胞孵育后低速离心（500×g，5 分钟）去除上清，用新鲜缓冲液重悬，降低背景。

检测参数与定量方法

荧光显微镜 / 共聚焦：355 nm 或 365 nm 激光激发，450-470 nm 发射滤光片，激光强度控制在 15-25%（避免强光导致的荧光漂白）；

定量校准：需使用 Cl?梯度标准液（如 5、10、20、40、80 mM）处理已染色细胞，绘制 “荧光强度 - Cl?浓度” 标准曲线（负相关），后续通过样本荧光强度在曲线上查找对应 Cl?浓度。

干扰因素排除

避免使用含高浓度还原剂（如 DTT）的缓冲液，还原剂可能导致 MQAE 荧光淬灭，影响检测结果；

若细胞含大量色素（如黑色素瘤细胞），可设置 “未加探针的细胞” 作为空白对照，通过软件扣除背景荧光后再定量。

总结

MQAE 凭借 “Cl?特异性荧光猝灭 + 低毒性 + 操作简便 + 多色兼容” 的核心优势，成为细胞内 Cl?检测的经典工具，尤其适合上皮转运功能分析、神经 Cl?信号监测及Cl?通道药物筛选。相比同类探针，其检测范围覆盖生理 Cl?浓度、特异性更高，且蓝色荧光为多维度实验提供了灵活联用空间，是细胞生理学、神经科学及药理学研究中不可或缺的离子分析探针。

本文引用地址：https://www.med-life.cn/product/1296561.html

联系方式：4006087598