MitoBright CMXRos 线粒体荧光探针（红色） 是一种氧化型红色荧光染料，含有氯甲基官能团，可以与有活性的线粒体发生特异性弱巯基反应可共价结合到线粒体上，以标记线粒体。MitoBright CMXRos 线粒体荧光探针（红色） 只需与活细胞简单孵育即可被动运输穿过细胞膜并直接聚集在活性线粒体上，该染料的积累大部分取决于膜电位的高低。一旦线粒体被染色后，还可根据后续实验的需求用醛类固定剂进行固定。对于免疫组化及原位杂交实验，细胞需先经过透化，MitoBright CMXRos 线粒体荧光探针（红色） 还可染色透化细胞的线粒体，但荧光亮度会有所降低。该染料适合双标记实验，其红色荧光与其他的绿色荧光探针可以很好地区分开来。

虽然传统的线粒体荧光探针如 TMR 和罗丹明 123，也可以很容易地聚集在功能线粒体上，但是一旦线粒体膜电位丧失即会被洗掉，从而在一些需要细胞进行醛类固定或者包含线粒体能量状态影响因子的实验中，使其应用大受限制。

一、核心优势：靶向精准性与膜电位敏感性双功能

亲脂阳离子介导的线粒体特异性定位

MitoBright CMXRos 分子含三苯基膦阳离子基团，可通过线粒体膜电位（ΔΨm，-150~-180 mV）的静电引力，主动穿透线粒体双层膜并富集于基质，定位特异性达 99% 以上，不与内质网、溶酶体等其他细胞器交叉染色（脱靶率＜1%）。

与非膜电位依赖性探针（如 MitoTracker Green）相比，其靶向结合更紧密，即使在细胞快速迁移或线粒体剧烈动态变化（如融合 / 分裂）时，仍能稳定锚定线粒体，避免信号漂移，适合长时间动态追踪。

膜电位敏感性，实时反映线粒体功能

荧光强度与线粒体膜电位正相关：膜电位正常时（健康细胞），探针富集多，红色荧光强（激发 / 发射≈579/599 nm）；膜电位下降时（如早期凋亡、氧化应激），探针外溢，荧光强度降低；膜电位完全丧失时（坏死细胞），荧光几乎消失。

可通过荧光强度变化定量评估膜电位水平，比 JC-1（需红绿信号比值计算）操作更简便，适合高通量快速检测（如 96 孔板药物对膜电位的影响筛查）。

二、红色荧光的光谱优势与实验兼容性

低背景干扰，深层成像能力强

红色荧光（599 nm 发射）远离细胞自发荧光（多为蓝色 / 绿色，发射峰＜550 nm），在富含色素的细胞（如巨噬细胞、黑素细胞）或厚组织样本（如肿瘤类器官、脑切片）中，背景噪音比绿色探针降低约 60%，信噪比可达 40:1 以上。

红色光在生物组织中的散射少，穿透深度可达 50-80 μm（绿色探针约 20-30 μm），适合 3D 细胞球内部线粒体成像或活体小动物成像（如小鼠皮下肿瘤内线粒体功能状态监测）。

多色实验无串扰，联用灵活

与绿色、蓝色探针光谱分离度高，串扰率＜1.5%，可构建 “线粒体功能 + 其他靶点” 的多维度检测体系：

MitoBright CMXRos（线粒体膜电位，红色）+ MitoSOX Red（线粒体 ROS，需避免红色重叠，建议换用绿色 ROS 探针如 6-CDCFDA）：同步监测膜电位与 ROS 水平，关联氧化应激对线粒体功能的损伤；

MitoBright CMXRos（红色）+ FITC-Annexin V（凋亡，绿色）+ DAPI（细胞核，蓝色）：区分早期凋亡（膜电位降、Annexin V+）、晚期凋亡（膜电位失、Annexin V+）与活细胞，细胞状态分类更精准；

流式实验中，可与 PE-CD3（免疫表型）联用，分析不同免疫细胞亚群的线粒体膜电位差异（如活化 T 细胞膜电位高于静息 T 细胞）。

三、活细胞兼容性与操作优势

低毒性，支持长期动态观察

工作浓度（50-200 nM）下，对线粒体呼吸链活性（ATP 生成量）、细胞增殖及凋亡无显著影响（HeLa 细胞存活率＞95%，线粒体复合物 III 活性与未标记组一致）。

不诱导氧化应激：探针自身 ROS 生成量＜3%，避免因标记导致的线粒体功能干扰，适合敏感样本（如神经元、胚胎干细胞）的长期研究（如 72 小时内神经元线粒体动态追踪）。

操作简便，适配多检测平台

染色步骤简单：直接加入培养基孵育 15-30 分钟，无需透膜或固定，比免疫荧光标记节省 2-3 小时；

兼容多种检测手段：

荧光显微镜 / 共聚焦：观察线粒体形态与膜电位空间分布（如胞质边缘线粒体膜电位高于核周）；

流式细胞术：定量细胞群膜电位异质性（如肿瘤干细胞膜电位显著高于普通肿瘤细胞）；

微孔板 reader：高通量筛选影响膜电位的药物（如线粒体保护剂、凋亡诱导剂）。

四、典型应用场景

线粒体功能与细胞凋亡研究

凋亡早期检测：用凋亡诱导剂（如星形孢菌素）处理细胞，MitoBright CMXRos 荧光在 1 小时后即开始减弱（膜电位下降），比 Annexin V（2-3 小时阳性）更早捕捉凋亡信号，可通过荧光强度半定量凋亡进程。

氧化应激损伤评估：H?O?处理心肌细胞，荧光强度随处理时间延长而降低，6 小时后荧光强度仅为初始的 40%，配合线粒体形态观察（碎片化），同步分析膜电位下降与结构损伤的关联。

肿瘤与干细胞研究

肿瘤干细胞分选：流式细胞术检测肿瘤细胞群，MitoBright CMXRos 低荧光细胞群（低膜电位）为肿瘤干细胞富集亚群，分选后可进一步验证其成瘤能力（如裸鼠皮下成瘤率高于高荧光细胞群）。

干细胞分化监测：间充质干细胞向心肌细胞分化过程中，MitoBright CMXRos 荧光强度逐渐升高（膜电位增强），分化成熟时荧光强度为未分化细胞的 2.5 倍，可作为分化成熟度的指标之一。

活体与高通量研究

活体肿瘤成像：标记小鼠皮下移植瘤细胞，通过活体荧光成像观察肿瘤内 MitoBright CMXRos 荧光分布，化疗药物处理后，肿瘤区域荧光强度降低，提示线粒体功能损伤，可实时评估药物疗效。

药物筛选：96 孔板培养细胞，加入候选药物与 MitoBright CMXRos，微孔板 reader 检测荧光强度，筛选能维持或恢复荧光的线粒体保护药物（如辅酶 Q10 衍生物），比传统 ATP 检测更直接反映线粒体功能。

五、技术优化与注意事项

染色浓度与时间控制

活细胞标记：50-200 nM 孵育 15-30 分钟，避免高浓度（＞500 nM）导致的非特异性染色或膜电位干扰；

长时间追踪（＞24 小时）：建议使用 100 nM 低浓度，每 12 小时补充一次探针，维持稳定荧光信号。

膜电位特异性验证

实验需设置阳性对照（如 FCCP 处理，膜电位完全丧失，荧光消失）与阴性对照（正常细胞），通过荧光差异验证信号特异性；若需排除非膜电位因素，可联用非膜电位依赖性探针（如 MitoTracker Green）对比。

成像与检测参数

荧光显微镜：555 nm 激光激发，600-620 nm 发射滤光片，激光强度控制在 15-25%（避免强光损伤线粒体）；

流式细胞术：561 nm 激光激发，610/20 nm 带通滤光片，以正常细胞为参照，设定荧光强度阈值区分膜电位高低细胞群。

总结

MitoBright CMXRos 凭借 “膜电位敏感性 + 红色荧光低干扰 + 低毒性” 的核心优势，成为线粒体功能研究的高效工具，尤其适合早期凋亡检测、活体成像及高通量药物筛选。相比传统膜电位探针（如 JC-1），其操作更简便、抗光漂白能力更强；相比非膜电位探针，其能同步反映线粒体功能状态，为线粒体生物学、疾病机制及药物研发提供精准的可视化方案。

?本文引用地址：https://www.med-life.cn/product/1296793.html

联系方式：4006087598