MitoBright 线粒体荧光探针（绿色） 是一种线粒体绿色荧光染料，可在纳摩尔水平对线粒体进行染色标记，该染料具有质膜透性，且在线粒体膜上积累而呈现明亮的荧光。该染料在线粒体中的定位不依赖于线粒体膜电位。

MitoBright 线粒体荧光探针（绿色） 的弱硫醇反应的氯甲基基团可以与线粒体共价结合，相对于线粒体荧光探针罗丹明 123 膜电位消失时更容易从细胞中洗掉的特点，MitoBright 线粒体荧光探针（绿色） 在一些需要细胞进行醛类固定或者包含线粒体能量状态影响因子的实验中有更好的优势。但染色固定细胞信噪比不理想，在细胞固定、透化之后，会导致荧光信号减弱或丢失，所以更适合用来染活细胞。

一、核心优势：线粒体靶向的精准性与稳定性

靶向基团介导的特异性定位

MitoBright 分子含亲脂性阳离子基团（如三苯基膦），可通过线粒体膜电位（ΔΨm，通常为 - 150~-180 mV）的静电引力，主动富集于线粒体基质，定位特异性达 98% 以上，不与其他细胞器（如内质网、溶酶体）交叉染色。

与传统线粒体探针（如 MitoTracker Green）相比，其靶向结合力更强，即使在轻度膜电位下降（如早期凋亡）时，仍能维持线粒体定位（脱靶率＜2%），避免因膜电位波动导致的信号丢失，适合线粒体功能动态监测。

荧光信号稳定，抗光漂白能力强

激发 / 发射波长约 490/516 nm，绿色荧光量子产率达 0.88，亮度比 MitoTracker Green 高 15%，低浓度（50-200 nM）即可实现清晰标记，减少对线粒体呼吸链的干扰。

抗光漂白能力优异：共聚焦显微镜连续扫描 30 分钟，荧光衰减率＜10%（MitoTracker Green 约 25%），适合长时间延时成像（如 12 小时内线粒体融合与分裂的动态追踪）。

二、活细胞兼容性与功能拓展优势

低毒性，不干扰线粒体功能

工作浓度（50-200 nM）下，对线粒体呼吸链活性（如 ATP 生成量）、膜电位及细胞活性无显著影响（HeLa 细胞存活率＞95%，线粒体复合物 IV 活性与未标记组一致）。

不诱导氧化应激：探针自身 ROS 生成量＜5%，避免因标记导致的线粒体损伤，适合敏感样本（如神经元、干细胞）的线粒体研究（如神经退行性疾病模型中的线粒体形态变化）。

适配线粒体功能多维度分析

形态动态观察：清晰显示线粒体的管状、网状或碎片化形态，可通过 ImageJ 量化线粒体长度、分支数，分析药物（如紫杉醇）或应激（如缺氧）对线粒体形态的影响（如碎片化程度升高提示细胞凋亡）；

膜电位关联监测：虽为非膜电位依赖性探针（绿色），但可与膜电位敏感性探针（如 JC-1，红色）联用，同步观察线粒体形态与膜电位变化（如形态碎片化 + JC-1 红色荧光降低，提示线粒体功能损伤）；

细胞凋亡早期检测：在凋亡早期（Caspase 激活前），线粒体形态已出现碎片化，MitoBright 可通过形态变化提前捕捉凋亡信号，比 Annexin V（晚期凋亡标记）早 2-4 小时检测到细胞凋亡趋势。

三、光谱特性与实验兼容性

绿色荧光适配常规平台，低背景干扰

荧光波长与 FITC、Alexa Fluor 488 高度重叠，可直接使用荧光显微镜的 FITC 通道（488 nm 激光激发）或流式细胞仪的绿色荧光通道检测，无需特殊滤光片或激光源，适配绝大多数实验室设备。

绿色荧光远离细胞自发荧光（蓝色 / 红色），在复杂样本（如肿瘤类器官、脑组织切片）中背景噪音低，信噪比可达 35:1 以上，深层细胞（如类器官内部）的线粒体信号仍清晰可辨。

多色实验灵活联用，无串扰

与红色 / 远红外探针联用无光谱串扰，可构建 “线粒体 + 其他靶点” 的多维度检测体系：

MitoBright（线粒体，绿色）+ LysoTracker Red（溶酶体，红色）：观察线粒体 - 溶酶体接触（Mitophagy），分析线粒体自噬过程；

MitoBright（线粒体，绿色）+ 6-CDCFDA（ROS，绿色需避免重叠，建议换用红色 ROS 探针如 MitoSOX Red）：同步监测线粒体形态与 ROS 水平，关联氧化应激对线粒体的损伤；

流式实验中，可与凋亡标志物（如 PE-Annexin V）联用，量化线粒体形态异常的细胞比例与凋亡率的相关性。

四、典型应用场景

线粒体形态与动态研究

细胞应激实验：缺氧处理 HUVEC 细胞，MitoBright 标记后通过延时摄影观察，缺氧 6 小时线粒体从管状变为碎片化，12 小时碎片化程度进一步升高，可量化碎片线粒体比例（从 10% 升至 60%），关联缺氧对线粒体结构的损伤。

神经退行性疾病模型：在阿尔茨海默病小鼠神经元中，MitoBright 显示线粒体长度缩短、分支减少，配合 tau 蛋白抗体（红色）共染，观察到异常 tau 蛋白聚集区域的线粒体形态损伤更显著，提示线粒体功能异常与疾病进展的关联。

线粒体自噬与凋亡研究

线粒体自噬检测：MitoBright（绿色）+ LC3B-PE（红色，自噬标志物）共染，饥饿诱导自噬后，观察到绿色线粒体与红色自噬体共定位，证明线粒体被包裹进入自噬体，可量化 Mitophagy 效率（共定位点数量 / 总线粒体数量）。

凋亡早期监测：化疗药（如顺铂）处理 A549 细胞，MitoBright 在处理 2 小时后即观察到线粒体碎片化，而 Annexin V 在 4 小时后才出现阳性信号，可通过线粒体形态变化早期预测细胞凋亡趋势。

高通量药物筛选

线粒体保护药物筛选：96 孔板培养细胞，加入候选药物（如辅酶 Q10 衍生物）与线粒体毒素（如鱼藤酮），MitoBright 染色后通过微孔板 reader 检测荧光均匀度（碎片化线粒体荧光分布不均），筛选能维持线粒体形态的药物，比传统 ATP 检测更直观反映线粒体保护效果。

五、技术优化与注意事项

染色浓度与时间控制

活细胞标记：50-200 nM MitoBright 孵育 15-20 分钟，避免高浓度（＞500 nM）导致的线粒体毒性（如膜电位下降）；

长时间追踪（＞6 小时）：建议使用 100 nM 低浓度，每隔 6 小时补充一次探针，维持稳定荧光信号。

避免膜电位干扰因素

实验需避免使用影响膜电位的试剂（如缬氨霉素、 FCCP），若需研究膜电位变化，应选择 MitoBright 与 JC-1 的双染方案，而非单独使用 MitoBright（绿色为非膜电位依赖性）。

成像参数设置

荧光显微镜：488 nm 激光激发，510-530 nm 发射滤光片，激光强度控制在 10-20%（避免强光损伤线粒体）；

共聚焦成像：选择 1.4 NA 高数值孔径物镜，Z 轴切片厚度 1 μm，重建线粒体三维形态，分析空间分布差异。

总结

MitoBright 凭借 “精准线粒体靶向 + 高稳定性绿色荧光 + 低毒性” 的核心优势，成为线粒体活细胞研究的高效工具，尤其适合线粒体形态动态追踪、早期凋亡检测及高通量药物筛选。相比传统探针，其抗光漂白能力与功能适配性更优，为线粒体生物学、疾病机制及药物研发提供了直观的可视化方案。

本文引用地址：https://www.med-life.cn/product/1296456.html

联系方式：4006087598

?