6-羧基-2', 7'-二氯荧光素二乙酸酯（6-CDCFDA，绿色） 是一种活细胞荧光示踪探针，具有膜通透性，可以孵育细胞后进行染色。6-羧基-2', 7'-二氯荧光素二乙酸酯（6-CDCFDA，绿色）一旦进入细胞，非荧光性 6-羧基-2', 7'-二氯荧光素二乙酸酯（6-CDCFDA，绿色） 的乙酸酯基团会被细胞内的酯酶水解成 6-羧基-2',7'-二氯荧光素并产生荧光。本产品对 pH 敏感，可作为酸性 pH 敏感探针。

一、核心优势：ROS 响应性与活细胞特异性双功能

ROS 介导的荧光激活，特异性检测氧化应激

6-CDCFDA 为非荧光脂溶性前体（分子量≈521 Da），分子结构中 2',7'- 位的二氯取代基使荧光素母核处于 “淬灭状态”；进入活细胞后，首先被胞内酯酶水解去除乙酰甲酯（AM）基团，生成 6 - 羧基 - 2',7'- 二氯荧光素（6-CDCF）；当细胞内存在 ROS（如 H?O?、?OH、ONOO?）时，6-CDCF 被氧化，二氯取代基脱落，荧光素母核恢复荧光活性，发出绿色荧光（激发 / 发射≈495/520 nm）。

ROS 检测特异性远高于普通荧光素探针（如 DCFDA）：二氯取代基降低了探针对非 ROS 氧化剂（如谷胱甘肽氧化酶）的响应，仅对高活性 ROS 敏感，检测特异性提升约 40%，可精准区分 “生理性 ROS” 与 “病理性氧化应激”（如炎症、药物诱导的 ROS 爆发）。

活细胞酯酶依赖激活，排除死细胞干扰

仅活细胞内的活性酯酶可水解 6-CDCFDA 的 AM 基团，死细胞或膜破损细胞因酯酶失活无法激活探针，因此荧光信号仅来源于活细胞，避免死细胞非特异性荧光导致的假阳性，活细胞检测准确率＞98%，适合混合细胞群（如凋亡 / 坏死细胞共存样本）的 ROS 分析。

二、光谱特性与检测性能优势

高亮度绿色荧光，低背景与高信噪比

氧化激活后的 6-CDCF 荧光量子产率达 0.85，亮度比未取代的 DCFDA 高 25%，低浓度（1-5 μM）即可实现清晰荧光信号，减少探针自身对细胞 ROS 水平的干扰（避免高浓度探针引发的氧化应激）。

绿色荧光（520 nm 发射）远离细胞自发荧光（多为蓝色 / 红色，发射峰＜500 nm 或＞600 nm），在复杂样本（如肿瘤组织切片、炎症细胞群）中背景噪音低，信噪比可达 30:1 以上，优于红色 ROS 探针（如 MitoSOX Red，背景易受血红蛋白干扰）。

宽 ROS 检测范围，适配多场景需求

可检测多种类型的活性氧，包括过氧化氢（H?O?）、羟基自由基（?OH）、过氧亚硝基（ONOO?）等，检测浓度范围为 0.1-100 μM，覆盖生理性（1-10 μM）与病理性（＞10 μM）ROS 水平，适合：

基础研究：如细胞代谢产生的生理性 ROS 监测；

应用研究：如药物（如化疗药）诱导的病理性 ROS 爆发、环境毒素（如重金属）引发的氧化应激评估。

三、活细胞兼容性与操作优势

低毒性，支持长时间动态观察

工作浓度（1-5 μM）下对细胞活性、增殖及代谢影响极小（如 HeLa 细胞存活率＞95%，线粒体呼吸链功能正常），不引发额外氧化应激（探针自身 ROS 诱导率＜5%），可用于 24 小时内的 ROS 动态追踪（如氧化应激损伤后的 ROS 清除过程）。

不干扰细胞凋亡信号通路（如 Caspase 激活、线粒体膜电位变化），适合同步观察 ROS 水平与凋亡状态（如通过 6-CDCFDA+Annexin V 双染，分析 ROS 升高与凋亡的时序关系）。

操作简便，适配多检测平台

无需复杂预处理：直接加入培养基或缓冲液（如 PBS、HBSS），37℃孵育 20-30 分钟即可完成染色，比免疫荧光标记节省 2-3 小时，适合高通量实验（如 96 孔板药物筛选）；

兼容多种检测手段：

荧光显微镜：观察 ROS 在细胞内的空间分布（如线粒体、胞质中的 ROS 差异）；

流式细胞术：定量细胞群的 ROS 水平异质性（如氧化应激敏感细胞亚群的比例）；

微孔板 reader：高通量定量 ROS 相对水平（如药物处理后的荧光强度变化）。

四、典型应用场景

氧化应激与细胞凋亡研究

药物诱导的氧化应激评估：用化疗药（如阿霉素）处理肿瘤细胞，6-CDCFDA 染色后通过流式细胞术检测 ROS 水平，发现药物处理组荧光强度比对照组升高 2-3 倍，且 ROS 升高先于 Annexin V 阳性（凋亡），证明 ROS 是药物诱导凋亡的上游信号。

缺血再灌注损伤模型：在心肌细胞缺血再灌注实验中，6-CDCFDA 标记后通过共聚焦显微镜观察，再灌注阶段胞质与线粒体 ROS 显著升高，配合线粒体标记（如 MitoTracker Red），可定位 ROS 主要产生部位（线粒体），分析损伤机制。

环境毒素与氧化损伤评估

重金属毒性检测：用铅（Pb2?）或汞（Hg2?）处理肝细胞（HepG2），6-CDCFDA 荧光强度随重金属浓度升高而增强，可建立剂量 - 效应关系，量化毒素引发的氧化应激程度，比传统酶活检测（如 SOD、GSH）更快速（检测时间缩短至 1 小时）。

高通量药物筛选

抗氧化药物筛选：在 96 孔板中培养细胞，加入候选抗氧化剂（如维生素 E 衍生物）与 ROS 诱导剂（如 H?O?），6-CDCFDA 染色后通过微孔板 reader 检测荧光强度，筛选能显著降低荧光信号的药物，计算抗氧化活性 IC??，适合大规模药物初筛。

五、技术优化与注意事项

染色浓度与孵育时间控制

活细胞 ROS 检测：1-5 μM 6-CDCFDA 孵育 20-30 分钟，避免高浓度（＞10 μM）导致的探针自身氧化或细胞毒性；

低 ROS 水平样本（如生理性 ROS）：可提高至 5 μM 并延长孵育至 40 分钟，增强荧光信号；高 ROS 样本（如药物诱导）：1-2 μM 即可避免荧光饱和。

ROS 特异性验证

实验需设置阳性对照（如 H?O?处理组）与阴性对照（如加入 ROS 清除剂 NAC 的组），通过荧光强度差异验证信号特异性；若需排除线粒体 ROS 干扰，可联用线粒体 ROS 抑制剂（如 MitoTEMPO）。

检测平台参数设置

荧光显微镜：488 nm 激光激发，515-535 nm 发射滤光片，避免强光长时间照射导致的荧光漂白；

流式细胞术：488 nm 激光激发，530/30 nm 带通滤光片，以未处理细胞为阴性参照，计算 ROS 阳性细胞比例。

总结

6-CDCFDA 凭借 “ROS 特异性响应 + 活细胞标记 + 低毒性” 的核心优势，突破了传统 ROS 探针 “特异性低” 或 “毒性高” 的局限，可同步实现活细胞筛选与 ROS 定量，尤其适合氧化应激机制研究、药物毒性评估及高通量抗氧化药物筛选。相比 DCFDA，其 ROS 检测特异性与荧光亮度更优；相比线粒体特异性 ROS 探针，其检测范围更广，是细胞氧化应激研究的高效工具。

?本文引用地址：https://www.med-life.cn/product/1296699.html

联系方式：4006087598