荧光黄尸胺（Lucifer Yellow Cadaverine，绿色） 通常作为可固定的荧光示踪剂。荧光黄尸胺（Lucifer Yellow Cadaverine，绿色） 可以标记细胞中的内吞噬泡。由于其水溶解度高、荧光明亮、细胞毒性低并且具有较宽的斯托克斯位移 (Stokes shift)，我们可以在固定细胞和活细胞中观察内吞噬泡。此外，它还可以用于结合羧酸基团。

一、核心功能优势：通透性分析与特异性结合

细胞膜完整性的精准探针

LYC 为小分子荧光染料（分子量≈457 Da），含游离氨基（-NH?），正常情况下无法穿透完整细胞膜；仅当细胞膜出现破损（如坏死、机械损伤）或紧密连接破坏（如上皮屏障功能受损）时，才能进入细胞并发出绿色荧光（激发 / 发射≈428/536 nm）。

与台盼蓝、PI 等染料相比，LYC 的荧光信号更灵敏（检测阈值比台盼蓝低 10 倍），且能区分 “膜破损” 与 “紧密连接开放” 两种不同的通透性变化（如肠上皮细胞紧密连接开放时，LYC 可通过细胞间隙扩散，而 PI 仅能标记膜破损细胞）。

氨基介导的特异性结合，适配多靶点标记

LYC 的氨基可与细胞内 / 外的羧基（-COOH）、醛基（-CHO）等基团共价结合，尤其对细胞外基质（如胶原蛋白、纤连蛋白）、细胞骨架（如肌动蛋白）及分泌蛋白具有高亲和力，可用于：

标记细胞外基质网络，观察基质重构（如肿瘤微环境中胶原纤维的排列变化）；

追踪细胞分泌过程，通过 LYC 标记分泌蛋白，观察其从高尔基体到细胞膜的运输路径。

二、绿色荧光的光谱优势与实验兼容性

低背景干扰，适配常规检测平台

绿色荧光（536 nm 发射）远离细胞自发荧光的主要波段（蓝色 / 红色），在活细胞或组织样本中背景噪音低，信噪比可达 20:1 以上（优于同类绿色染料如 FITC，约 15:1）。

激发波长 428 nm 可适配紫外 - 蓝光激光器（如荧光显微镜的 405 nm 或 488 nm 激光），无需特殊滤光片，直接使用 FITC 通道即可检测，兼容流式细胞仪、共聚焦显微镜等常规设备。

多色实验灵活联用，无串扰

与红色 / 远红外探针联用无光谱重叠，可构建 “通透性 + 功能” 双检测体系：

LYC（细胞膜通透性 / 基质，绿色）+ DAPI（细胞核，蓝色）+ 罗丹明 - 鬼笔环肽（肌动蛋白，红色）：同步观察膜完整性、核形态与细胞骨架关联；

上皮细胞实验中，LYC（紧密连接，绿色）+ ZO-1 抗体（红色，紧密连接蛋白）：通过共定位分析紧密连接破坏与 LYC 渗透的关联性，量化屏障功能损伤程度。

三、活细胞兼容性与操作优势

低毒性，支持长时间动态观察

工作浓度（10-50 μM）下对细胞活性影响极?。ㄈ?Caco-2 肠上皮细胞存活率＞95%），不干扰细胞增殖、分化或分泌功能（如胰岛 β 细胞胰岛素分泌量与未标记组一致）。

可用于 48 小时内的动态追踪（如上皮细胞屏障功能修复过程中，LYC 渗透量的实时变化），荧光信号在活细胞中可维持 24 小时以上，抗光漂白能力优于普通荧光蛋白（如 GFP）。

操作简便，样本普适性广

无需复杂预处理：直接加入培养基或缓冲液即可染色，无需透膜、抗体孵育，比免疫荧光标记节省 3-4 小时；

适配多种样本类型：可用于贴壁细胞（如上皮细胞、内皮细胞）、悬浮细胞（如免疫细胞）、组织切片（如肠黏膜、皮肤表皮）及 3D 类器官（如肠道类器官屏障功能检测）。

四、典型应用场景

上皮 / 内皮屏障功能研究

肠上皮细胞（Caco-2）模型中，LYC 用于检测紧密连接完整性：当炎症因子（如 TNF-α）破坏紧密连接时，LYC 可通过细胞间隙进入基底侧，通过荧光强度量化屏障渗透率，评估药物（如抗炎药）的修复效果。

血管内皮细胞（HUVEC）实验中，LYC 标记血管内皮屏障，观察缺氧条件下内皮细胞连接的开放程度，关联血管通透性与血栓形成的关系。

细胞外基质与骨架研究

肿瘤微环境研究：LYC 标记肿瘤细胞外基质中的胶原纤维，通过共聚焦显微镜观察基质纤维化程度，分析 LYC 与胶原的结合分布，关联肿瘤侵袭能力（如高侵袭性肿瘤周围 LYC 标记的胶原排列更紊乱）。

细胞骨架动态：LYC 与肌动蛋白的羧基结合，标记应力纤维，观察细胞迁移时骨架的重组过程（如伪足伸展时 LYC 荧光的动态分布）。

细胞内吞与分泌追踪

巨噬细胞内吞实验：LYC 标记细菌或凋亡小体，通过荧光成像观察内吞体的形成与运输，量化内吞效率（如 LPS 刺激后巨噬细胞的内吞速率变化）。

分泌细胞功能检测：LYC 标记胰腺 β 细胞的胰岛素颗粒，追踪颗粒从高尔基体到细胞膜的分泌路径，评估葡萄糖刺激下的胰岛素分泌动态。

五、技术优化与注意事项

浓度与孵育时间控制

膜完整性检测：10-20 μM LYC 孵育 30-60 分钟，避免高浓度（＞50 μM）导致的非特异性膜渗透；

基质 / 骨架标记：20-50 μM LYC 孵育 1-2 小时，确保氨基与羧基充分结合，染色后用 PBS 洗涤 2 次减少背景。

pH 与缓冲液适配

LYC 在中性 pH（7.2-7.4）下荧光强度最高，酸性（pH＜6.0）或碱性（pH＞8.0）环境会导致荧光淬灭，实验需使用 PBS 或 HBSS 等中性缓冲液。

成像参数设置

荧光显微镜选择 405 nm 或 488 nm 激发，525-550 nm 发射滤光片；流式细胞术使用 488 nm 激光，530/30 nm 带通滤光片，避免与其他绿色荧光探针串扰。

总结

荧光黄尸胺凭借 “膜通透性分析 + 特异性结合 + 绿色荧光高信噪比” 的多功能优势，突破了传统染料 “功能单一” 的局限，既能精准检测细胞膜完整性与屏障功能，又能标记细胞外基质、细胞骨架及分泌蛋白，尤其适合上皮屏障、肿瘤微环境及细胞动态过程研究。相比 PI、FITC - 葡聚糖等单一功能染料，LYC 的 “一 dye 多能” 特性显著提升实验效率，是细胞生物学、药理学研究的高效工具。

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