DiI 细胞膜荧光探针（橙红色）是常用的细胞膜荧光探针之一，呈现橙红色荧光。DiI 细胞膜荧光探针（橙红色） 是一种亲脂性膜染料，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐染色整个细胞的细胞膜。DiI 细胞膜荧光探针（橙红色） 在进入细胞膜之前荧光非常弱，当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。

DiI 细胞膜荧光探针（橙红色） 作为示踪剂或长期示踪剂 (Long-Term Tracer)，可以被广泛用于正向或逆向、活的或固定的神经等细胞或组织。DiI 细胞膜荧光探针（橙红色） 通常不会影响细胞的生存力 (viability)。被 DiI 细胞膜荧光探针（橙红色） 标记的神经细胞在体外培养的条件下可以存活长达 4 周，在体内可以长达一年。DiI 细胞膜荧光探针（橙红色） 在被固定的神经元细胞膜上的迁移速率为 0.2~0.6 mm/day，在活的神经元细胞膜上的迁移速率为 6 mm/day。

DiI 细胞膜荧光探针（橙红色） 除了用于细胞膜荧光标记外，还可用于检测细胞的融合和粘附、发育或移植过程中细胞的迁移，通过 FRAP（光脱色荧光恢复技术）检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。

在固定透化（室温下用 0.1% TritonX-100 透化）后，可以用DiI 细胞膜荧光探针（橙红色）进行质膜染色，也可以在 DiI 细胞膜荧光探针（橙红色） 染色后可进行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他试剂）的固定，但不建议在染色后进行透化。DiI 细胞膜荧光探针（橙红色） 激发发射光谱请见产品参数。DiI 细胞膜荧光探针（橙红色） 常与 DiA 一起用于细胞膜双色标记。

一、细胞膜标记的高稳定性与特异性

双疏水链锚定，膜结合持久

DiI 分子含两条 C18 疏水长链，可深度嵌入细胞膜脂质双分子层，形成稳定的 “膜 - 染料” 复合物，不依赖膜蛋白或受体，对原核、真核细胞均适用（如酵母、哺乳动物细胞、植物原生质体）。

标记后仅分布于细胞膜，呈现连续的橙红色荧光环，内吞率极低（＜1%/ 小时），远低于 DiO（＜5%/ 小时），信号可在活细胞中维持 24-72 小时，即使细胞迁移、分裂也不易脱落（如肿瘤细胞的侵袭伪足仍能保持清晰荧光）。

低背景干扰，细胞边界清晰

橙红色荧光（发射峰 565 nm）远离细胞自发荧光（多为蓝色 / 绿色），在富含色素的细胞（如巨噬细胞、黑素细胞）或组织切片中，背景噪音比绿色探针降低约 40%，可清晰分辨细微膜结构（如上皮细胞的紧密连接、神经元的轴突末梢）。

二、橙红色荧光的光谱优势与多色兼容性

适配常规仪器，穿透性更佳

激发 / 发射波长约 549/565 nm，可直接使用荧光显微镜的 TRITC 通道（546 nm 激发）或流式细胞仪的黄激光通道（561 nm 激发）检测，无需特殊滤光片或激光源，适配绝大多数实验室设备。

橙红色光在生物组织中的散射少于绿色光，穿透深度可达 30-50 μm，适合 3D 细胞球（如肿瘤类器官）或厚组织切片（如小鼠胚胎切片）的细胞膜成像，外层与深层细胞的膜信号均能清晰捕捉。

多色实验无串扰，联用灵活

与绿色（FITC、GFP）、远红外（Cy5、APC）探针联用时，光谱分离度高，串扰率＜2%，可构建多维检测体系：

DiI（细胞膜）+ FITC-Annexin V（凋亡）+ DAPI（细胞核）：同步观察细胞膜形态、凋亡状态与核结构；

流式实验中，可与 PE-CD4（免疫表型）、7-AAD（细胞活性）同时检测，实现 “膜标记 + 免疫分型 + 活性分析” 一站式研究，细胞群分群更精准。

三、活细胞长时程示踪与低毒性优势

细胞分裂示踪，增殖可视化

DiI 在细胞内不被代谢降解，细胞分裂时会随细胞膜平均分配至子细胞，荧光强度减半（母细胞荧光强度为子细胞的 2 倍），可通过荧光强度变化直观判断细胞分裂次数（如原代干细胞的克隆增殖过程），无需依赖 Brdu 等增殖标志物。

低毒性，不干扰细胞功能

工作浓度（1-5 μM）下对细胞活性、增殖及分化无显著影响（如 HUVEC 细胞存活率＞95%，神经元轴突生长速度正常），可用于 72 小时以上的长期动态观察（如细胞迁移的时序变化、肿瘤细胞的体外侵袭过程）。

标记后不影响膜蛋白功能（如受体结合、离子通道活性），适合研究膜蛋白介导的细胞行为（如 T 细胞与靶细胞的免疫突触形成）。

四、典型应用场景

细胞长时程示踪

发育生物学：DiI 标记斑马鱼胚胎的特定细胞群（如神经嵴细胞），追踪其在胚胎发育过程中的迁移路径（如向颅面部、脊柱的分化迁移）；

肿瘤转移研究：标记肿瘤细胞后接种于小鼠，通过活体荧光成像观察肿瘤细胞在体内的播散过程（如从原发灶向肺部、肝脏的转移）。

细胞迁移与侵袭

划痕实验：DiI 标记成纤维细胞，延时摄影量化细胞迁移速度与方向，结合 ImageJ 分析膜动态（如伪足伸展频率）；

Transwell 侵袭实验：标记肿瘤细胞，通过荧光强度定量穿膜细胞数，比结晶紫染色更灵敏、更客观。

细胞融合与膜动态

肌细胞分化：标记单核肌母细胞，观察其融合形成多核肌管的过程，荧光随膜融合逐渐扩散，直观显示融合效率；

病毒侵染：标记宿主细胞膜，观察病毒（如流感病毒）与细胞膜的融合位点，结合病毒蛋白荧光（如 HA-GFP），分析侵染机制。

组织与微生物标记

神经组织：DiI 标记脑片神经元，沿轴突方向扩散，可追踪神经元的投射路径（如海马 CA1 区神经元向齿状回的投射）；

细菌群落：标记大肠杆菌细胞膜，区分活菌（连续橙红色膜）与死菌（破碎膜，荧光弥散），评估抗生素的杀菌效果。

五、技术优化与注意事项

染色浓度控制：活细胞推荐 1-5 μM，高浓度（＞10 μM）可能导致膜荧光饱和，影响分裂示踪的定量准确性；

长时程成像保护：加入胆固醇（10 mM）或使用抗淬灭培养基，可减少染料内吞，延长膜荧光稳定性（＞72 小时）；

流式定量分裂次数：通过 DiI 荧光强度分布分析细胞群增殖状态，G0/G1 期细胞呈单峰，分裂一次后呈双峰，适合干细胞克隆效率评估。

总结

DiI 凭借 “持久膜锚定 + 橙红色荧光稳定性 + 分裂示踪能力” 的核心优势，成为细胞膜长时程研究的金标准探针，尤其适合跨时间尺度的细胞行为观察（从小时到数天）、组织穿透成像及多色实验联用。相比短期标记的 DiO，DiI 在长时程示踪与分裂可视化上更具不可替代性，是发育生物学、免疫学、肿瘤学研究的高效工具。

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