DiA 细胞膜荧光探针（绿色），荧光染料在科研领域中的优势

2025-10-20

DiA 细胞膜荧光探针（绿色）是?种亲脂性氨基苯乙烯基探针，它在细胞膜中的扩散速度比 DiO 快，经常和 DiI 一起使用于细胞膜双色标记，用于神经元膜示踪。

DiA 细胞膜荧光探针（绿色）染色后可进行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他试剂）的固定，但不建议在染色后进行透化。DiA 细胞膜荧光探针（绿色）对固定细胞的染色效果优于 DiO。激发发射光谱图请见产品参数。

一、细胞膜标记的高特异性与稳定性

双特性分子结构，膜锚定更精准

DiA 分子含一条 C16 疏水长链（嵌入细胞膜脂质双分子层）和一个亲水吡啶阳离子基团（锚定膜表面），这种 “疏水 - 亲水” 结构使其仅稳定分布于细胞膜，不进入胞质或细胞器（内吞率＜3%/ 小时），避免传统染料内吞导致的信号干扰。

标记后呈现均匀的绿色荧光膜环，细胞边界清晰（如神经元的轴突、树突膜，上皮细胞的紧密连接区域），即使在细胞收缩或伸展时，荧光仍紧密跟随膜形态变化，无脱附现象。

快速染色，信号即时稳定

活细胞染色无需预处理：1-3 μM DiA 加入培养基后，3-10 分钟即可完成标记，20 分钟内荧光强度达峰值（亮度比 DiO 高约 20%），适合高通量样本快速处理（如 96 孔板细胞形态筛查）。

固定与透膜后信号保留：4% 多聚甲醛固定或 0.1% Triton X-100 透膜后，DiA 荧光仍能维持 80% 以上强度，可与免疫荧光抗体（如抗 E - 钙粘蛋白）共染，分析膜蛋白与膜结构的关联。

二、绿色荧光的光谱优势与多场景适配

低背景干扰，适配常规检测平台

激发 / 发射波长约 485/510 nm，与 FITC、Alexa Fluor 488 光谱高度匹配，可直接使用荧光显微镜的 FITC 通道（488 nm 激光激发）或流式细胞仪的绿色荧光通道检测，无需特殊滤光片。

绿色荧光与细胞自发荧光（多为蓝色 / 红色）重叠少，在富含脂褐素的细胞（如衰老细胞）或植物细胞（含叶绿素）中，信噪比仍能保持 15:1 以上，成像清晰度优于同类绿色探针。

多色实验兼容性强

与红色 / 远红外探针联用无光谱串扰，可构建多维检测体系：

DiA（细胞膜）+ DAPI（细胞核）+ Alexa Fluor 594（细胞骨架）：同步观察细胞形态、核定位与骨架分布；

流式实验中，可与 PE-CD3（免疫表型）、7-AAD（细胞活性）同时检测，实现 “膜标记 + 免疫分型 + 活性分析” 一站式分析，串扰率＜2%。

三、膜流动性追踪与活细胞低毒性优势

独特的膜流动性响应能力

DiA 的荧光偏振度与细胞膜流动性直接相关：膜流动性升高时（如加入胆固醇抑制剂），荧光偏振度降低；膜流动性降低时（如低温处理），偏振度升高，可通过荧光偏振仪定量分析膜物理状态，这是 DiO、CM-DiI 等探针不具备的核心特性。

适合研究药物（如抗肿瘤药物）、环境因素（如温度、pH）对细胞膜流动性的影响，为膜功能机制提供量化数据。

低毒性，支持长时间动态观察

工作浓度（1-5 μM）下对细胞活性无显著影响（如 HUVEC 细胞增殖率＞95%，神经元轴突生长速度正常），可用于 72 小时内的长期动态追踪（如细胞迁移过程中的膜形态变化、细胞融合的膜融合动力学）。

标记后不影响膜蛋白功能（如受体结合、离子通道活性），适合研究膜蛋白介导的细胞行为（如 GPCR 激活后的膜褶皱变化）。

四、典型应用场景

细胞膜流动性研究

药物筛选：检测候选药物对肿瘤细胞膜流动性的影响，如紫杉醇类药物可降低膜流动性，DiA 荧光偏振度升高，可作为药物活性初筛指标；

环境胁迫分析：低温（4℃）或高渗（300 mM NaCl）处理细胞后，通过 DiA 偏振度变化量化膜流动性损伤程度。

细胞动态行为观察

细胞迁移：DiA 标记成纤维细胞膜，延时摄影观察伪足伸展时的膜动态（如膜凸起、回缩），结合 ImageJ 分析膜扩展速率；

细胞融合：标记巨噬细胞与肿瘤细胞，观察融合过程中膜结构的混合顺序（先 DiA 绿色膜融合，后胞质内容物混合），量化融合效率。

组织与微生物膜标记

神经组织：DiA 标记脑片神经元膜，清晰显示轴突分支与突触前膜形态，配合突触素抗体共染，定位突触位置；

细菌膜研究：标记大肠杆菌细胞膜，区分活菌（连续绿色膜）与死菌（破碎膜，荧光弥散），评估抗生素杀菌效果。

流式细胞术分析

细胞膜完整性分选：DiA 阳性（膜完整）细胞群可与 DiA 阴性（膜破损）细胞群高效分离，纯度达 98% 以上；

膜流动性定量：通过流式细胞术检测 DiA 荧光偏振度，分析细胞群中膜流动性异质性（如肿瘤干细胞与普通肿瘤细胞的膜流动性差异）。

五、技术优化与注意事项

染色浓度控制：活细胞推荐 1-3 μM，高浓度（＞5 μM）可能导致膜荧光饱和，影响偏振度检测；

膜流动性检测条件：荧光偏振实验需在 25-37℃恒温环境下进行，避免温度波动干扰膜流动性；

长期成像保护：搭配抗淬灭封片剂（如 ProLong Gold），可将荧光保存时间延长至 1 周以上，适合长期样本观察。

总结

DiA 凭借 “双特性分子结构 + 膜流动性追踪能力 + 高亮度绿色荧光” 的核心优势，在细胞膜研究中兼具 “特异性标记” 与 “功能量化” 双重价值，尤其适合膜流动性机制研究、长时间动态观察及多色实验联用。相比仅能标记膜结构的 DiO，DiA 为膜功能分析提供了量化工具，是细胞生物学、药理学研究的高效探针。

本文引用地址：https://www.med-life.cn/product/1296641.html

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