DiO 细胞膜荧光探针（绿色） 是一种亲脂性膜染料，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐染色整个细胞的细胞膜。DiO 细胞膜荧光探针（绿色） 在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，被激发后可以发出绿色荧光，具有很高的淬灭常数和激发态寿命，可以用标准的 FITC 滤光片检测。

DiO 细胞膜荧光探针（绿色） 作为示踪剂或长期示踪剂，被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织。DiO 细胞膜荧光探针（绿色）通常不会显著影响细胞的生存力。

DiO 细胞膜荧光探针（绿色） 除了细胞膜荧光标记外，还可用于检测细胞的融合和粘附、发育或移植过程中的细胞迁移，通过 FRAP（光脱色荧光恢复技术）检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。

在固定透化（室温下用 0.1% TritonX-100 透化）后，可以用DiO 细胞膜荧光探针（绿色）进行质膜染色，也可以在 DiO 细胞膜荧光探针（绿色） 染色后可进行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他试剂）的固定，但不建议在染色后进行透化。。DiO 细胞膜荧光探针（绿色） 染色强度通常低于 DiI，有时在固定组织中会完全丧失。激发和发射光谱请见产品参数。

以每次使用 100 μL 染色工作液，染色工作液浓度 10 μM 计算，10 mg 配置为工作液大概可以用11341 次。

DiO 细胞膜荧光探针（绿色） 溶于无水乙醇、无水 DMSO 和无水 DMF，在无水 DMSO 中的溶解度约为 10 mg/mL。较难溶解时，可以适当加热或者超声处理。

一、细胞膜标记的高效性与特异性

亲脂性插入，膜靶向性强

DiO 分子含两条 C18 疏水长链，可通过疏水作用嵌入细胞膜脂质双分子层，不依赖膜蛋白或受体，对原核、真核细胞均适用（如细菌、酵母、哺乳动物细胞）。

标记后仅分布于细胞膜，呈现连续的绿色荧光环，极少进入胞质或细胞器（内吞率＜5%/ 小时），背景荧光低，细胞边界清晰可辨（如贴壁细胞的伪足、悬浮细胞的球形轮廓）。

快速染色，信号即时可见

活细胞染色无需复杂预处理：1-5 μM DiO 加入培养基后，1-5 分钟即可完成标记，30 分钟内荧光强度达峰值，适合快速实验需求（如临时细胞形态观察、紧急样本检测）。

固定细胞中信号稳定：4% 多聚甲醛固定后，荧光可维持数天，抗光漂白能力优于普通荧光蛋白（如 GFP），适合长期样本保存与复染。

二、绿色荧光的光谱优势与多色兼容性

低干扰，适配常规检测平台

激发 / 发射波长约 488/501 nm，与 FITC、Alexa Fluor 488 光谱高度重叠，可直接使用荧光显微镜的 FITC 通道（488 nm 激光激发）或流式细胞仪的绿色荧光通道检测，无需特殊仪器。

绿色荧光与细胞自发荧光（多为蓝色 / 红色）重叠少，在低荧光背景样本中（如新鲜原代细胞、胚胎细胞）信噪比高，成像清晰度优于蓝色染料（如 Hoechst）。

多色实验兼容性强

与红色 / 远红外探针联用无光谱串扰，例如：

DiO（细胞膜）+ PI（细胞核 / 死亡细胞）：区分细胞形态与存活状态；

DiO（细胞膜）+ mCherry（细胞器标记，如线粒体）：观察细胞膜与细胞器的空间关联；

流式实验中，可与 APC-CD4（免疫表型）、7-AAD（死亡细胞）同时检测，实现 “膜标记 + 免疫分型 + 活性分析” 多参数分析。

三、活细胞动态监测与低毒性优势

低细胞毒性，适合短期动态观察

工作浓度（1-10 μM）下对细胞活性影响极小（如 HeLa 细胞存活率＞95%），不干扰细胞迁移、增殖或分化（如神经元轴突生长、肿瘤细胞侵袭）。

可用于短期动态追踪（1-6 小时），如细胞融合过程中膜结构变化、免疫细胞与靶细胞的接触界面观察，荧光信号随膜动态同步变化，无滞后性。

操作简便，样本普适性广

无需透膜、抗体孵育等步骤，直接加入培养基染色即可，比免疫荧光标记节省 2-3 小时；适配贴壁细胞、悬浮细胞、组织切片（如皮肤切片的表皮细胞边界）及 3D 细胞球（外层细胞膜清晰可见）。

1 mg/mL DMSO 储存液可长期保存（-20℃避光），使用时直接稀释，无需反复配制，降低实验误差。

四、典型应用场景

细胞形态与动态观察

划痕实验：DiO 标记成纤维细胞膜，通过荧光显微镜实时观察细胞迁移时的伪足延伸、膜褶皱变化，量化迁移速度；

细胞融合实验：分别用 DiO（绿色）和 DiI（红色）标记两种细胞，观察融合过程中膜结构的混合速率，分析融合效率。

免疫细胞相互作用

T 细胞与肿瘤细胞共培养：DiO 标记 T 细胞膜，绿色荧光勾勒 T 细胞轮廓，结合肿瘤细胞的红色荧光标记（如 CM-DiI），观察免疫突触形成的膜接触位点。

组织与微生物标记

植物原生质体：DiO 标记原生质体膜，清晰观察细胞壁再生过程中的膜形态变化；

细菌群落：标记大肠杆菌细胞膜，区分活菌（膜完整，绿色环连续）与死菌（膜破损，荧光弥散）。

流式细胞术分选与分析

基于细胞膜完整性分选：DiO 阳性（膜完整）细胞群可与 DiO 阴性（膜破损）细胞群有效分离，用于筛选活细胞克隆；

细胞大小分析：DiO 荧光强度与细胞膜表面积正相关，可辅助区分大细胞（如巨噬细胞）与小细胞（如淋巴细胞）。

五、技术优化与注意事项

染色浓度控制：活细胞推荐 1-5 μM，高浓度（＞10 μM）可能导致染料内吞增加，胞质出现非特异性荧光；

避免光漂白：长时间成像需搭配抗淬灭剂（如 DABCO），减少绿色荧光在激发光下的衰减；

活细胞保存：染色后样本需避光、37℃培养，避免低温（＜25℃）导致细胞膜流动性降低，影响染料分布。

总结

DiO 凭借 “快速标记 + 绿色荧光兼容 + 低毒性” 的核心优势，成为细胞膜研究的基础工具，尤其适合短期动态观察（如细胞迁移、融合）和多色实验联用（如免疫表型分析、细胞器共定位）。相比长时程示踪的 CM-DiI，DiO 在操作便捷性和常规平台适配性上更具优势，是实验室细胞膜标记的 “入门级优选探针”。

本文引用地址：https://www.med-life.cn/product/1296431.html

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