CelMBright 细胞膜荧光探针（橙红色） 是一种亲脂性碳菁类染料，能够有效、稳定地标记质膜及细胞内膜结构。它具有细胞毒性低且不会在细胞间转移的特性，与 PKH 类染料相比，CelMBright 染料使用方便、着色均匀，常被作为细胞融合、粘附、迁移的示踪分子。DiI（橙色荧光）与 DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）和其它细胞膜荧光染料如 DiR（近红外荧光）、NIR680（远红外染料）配合使用，为多色成像和流式细胞分析提供了有效的工具。

CelMBright 系列染料也可以用于甲醛固定后细胞的染色，同时兼容在染色后的甲醛固定步骤。此系列染料不适用于细菌或酵母。激发发射光谱可参考 DiI，请见产品参数。

以每次使用 100 μL 染色工作液计算，200 μL 原液可以用 400 次。

一、CelMBright 的分子设计与标记原理

CelMBright 是一种新型橙红色荧光细胞膜探针，通常为亲脂性羰花青染料衍生物（如 DiI 类似物），激发 / 发射波长约 551/565 nm，发出橙红色荧光。其核心优势源于膜靶向性设计、高亮度荧光及活细胞兼容性，可快速标记细胞膜，实现单细胞边界清晰成像。

二、细胞膜标记的高效性与特异性

1. 亲脂性锚定与膜特异性结合

CelMBright 的长链烷基结构（如 C18 脂肪链）使其能通过疏水作用嵌入细胞膜脂质双分子层，无需依赖膜蛋白或受体，对原核细胞、真核细胞的细胞膜均有高亲和力，标记后呈现连续的细胞膜荧光环，极少分布于细胞器。

与传统细胞膜染料（如 DiO）相比，CelMBright 的疏水性更强，与细胞膜结合更稳定，减少染料内吞导致的胞质荧光干扰（内吞率＜5%/ 小时）。

2.快速染色与信号稳定性

活细胞染色时，5-10 μM CelMBright 加入培养基后 1-5 分钟即可完成细胞膜标记，荧光强度在 30 分钟内达峰值，且标记后信号可持续 6-12 小时（固定细胞中可维持数天），适合动态追踪细胞迁移、融合等膜动态过程。

三、橙红色荧光的光谱优势

1. 低自发荧光干扰与多色兼容

橙红色荧光（565 nm）远离细胞内自发荧光（多为蓝色 / 绿色），在富含脂褐素或色素的细胞（如巨噬细胞、视网膜色素上皮细胞）中背景噪音降低约 40%，信噪比提升。

可与绿色荧光蛋白（GFP）、FITC 等绿色探针或远红外染料（如 Cy5）同时使用，例如 “CelMBright+GFP - 肌动蛋白” 同步观察细胞膜形态与细胞骨架动态，光谱串扰率＜3%。

2.适配多种检测平台

激发波长 551 nm 兼容常见的 561 nm 黄激光（流式细胞仪）或 TRITC 滤光片组（荧光显微镜），无需特殊仪器即可实现高分辨率成像，适合常规实验室使用。

四、活细胞动态监测与操作优势

1. 低毒性与长时程成像

CelMBright 工作浓度通常为 1-10 μM，对细胞增殖、迁移及分裂无显著影响（如 HeLa 细胞标记后划痕愈合速度保持 95% 以上），可用于原代细胞、干细胞等敏感样本的长期膜动态监测（如 48 小时内的细胞分化追踪）。

标记后不影响膜蛋白流动性，适合光漂白恢复实验（FRAP）分析膜脂流动性，荧光恢复速率与未标记细胞一致。

2.操作简便与样本普适性

无需透膜或抗体孵育，直接加入培养基即可染色，比免疫荧光标记节省 2-3 小时；适用于贴壁细胞、悬浮细胞、组织切片（如肿瘤切片的细胞边界勾勒）及 3D 细胞球模型。

五、典型应用场景

1.细胞迁移与侵袭研究

划痕实验中，CelMBright 标记细胞膜，通过延时摄影量化细胞迁移速度与方向，配合 DAPI 标记细胞核，分析迁移细胞的增殖状态（如伤口愈合区 Ki-67 + 细胞的膜动态）。

肿瘤细胞侵袭实验（Transwell）中，标记侵袭细胞的细胞膜，计算穿膜细胞数，比结晶紫染色更直观且可定量荧光强度。

2.细胞融合与分裂监测

干细胞融合形成多核细胞时，CelMBright 显示融合膜边界，结合 GFP 标记的线粒体，研究融合后细胞器重组；卵母细胞减数分裂时，标记细胞膜观察极体排出过程。

3.免疫细胞 - 肿瘤细胞相互作用

在 T 细胞与肿瘤细胞共培养体系中，CelMBright 分别标记肿瘤细胞（橙红色）和 T 细胞（如 CFSE 绿色），通过共聚焦显微镜观察免疫突触形成与肿瘤细胞杀伤效率。

4.组织切片细胞边界勾勒

1. 冰冻或石蜡切片中，CelMBright 标记细胞轮廓，辅助组织学结构分析（如肾切片中肾小球细胞边界识别），或与抗体共染（如 CD31 标记血管内皮）进行空间定位。

六、技术优化与注意事项

染色浓度与时间：活细胞推荐 5 μM 孵育 5 分钟，避免高浓度（>10 μM）导致的膜荧光饱和；固定细胞可提高至 10 μM 增强信号，染色后用 PBS 洗涤 2 次减少非特异性吸附。

内吞抑制策略：若需长时程成像（>6 小时），可在染色后加入低温（4℃）或代谢抑制剂（如 NaN?）减少染料内吞，维持细胞膜荧光强度。

流式细胞术设置：使用 561 nm 激光激发，585/42 nm 带通滤光片收集信号，可通过膜荧光强度区分细胞大小（如区分单核细胞与多核巨细胞）。

总结

CelMBright 通过亲脂性分子设计、橙红色荧光优化及活细胞低毒性特性，成为细胞膜标记的高效工具。其 “快速标记 + 稳定信号 + 多色兼容” 的优势，尤其适合需要动态追踪膜结构变化的场景（如细胞迁移、融合），或与其他荧光探针联用进行多参数分析，为细胞生物学、肿瘤学及免疫学研究提供了清晰的细胞膜可视化方案。

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