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即用型 DAPI（蓝色）， 荧光染料在科研领域中的优势

2025-10-09

即用型 DAPI（蓝色） 是一种可对 DNA 染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链 DNA 后释放蓝色荧光，亮度增强约 20 倍。即用型 DAPI（蓝色） 常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。即用型 DAPI（蓝色） 具有很高的光漂白承受水平，能用来检测酵母线粒体 DNA、叶绿体 DNA、病毒 DNA 以及染色体 DNA 等。在较低浓度 (1 μg/mL) 时，即用型 DAPI（蓝色） 不可渗透于活细胞，但可用作固定细胞或组织部分的核染色剂；在较高浓度 (10 μg/mL) 时，DAPI 可用于染色活细胞。

以贴壁细胞（96 孔板）举例，每孔 100 μL 染色工作液，染色工作液浓度按 5 μg/mL 计算，10 mg配置为工作液大概可以用于 20000 个孔的染色。

一、预配置设计的实验效率优化

  1. 免配制，直接使用

即用型 DAPI 以工作浓度（通常为 1 μg/mL~10 μg/mL）预先配制于缓冲液中（如 PBS 或抗淬灭剂），无需用户自行溶解、稀释或调整 pH，避免因操作误差（如称量不准、溶剂污染）导致的染色效果波动，实验准备时间缩短 50% 以上。

2.稳定性与长期保存

采用无菌分装，避光保存于 - 20℃或 4℃，保质期可达 6~12 个月，且每次使用时无需反复冻融，维持染料活性稳定（荧光强度衰减率 < 5%/ 月）。

二、DNA 标记的高效性与特异性

  1. 高亲和力与快速染色

与双链 DNA 的 A-T 碱基对特异性结合，结合常数 K≈10? M?1，固定细胞或组织切片染色时，5 分钟内即可完成细胞核标记，荧光信号强度比自配 DAPI 溶液高 10%~20%（因预配置含优化助溶剂）。

2.低背景与高信噪比

即用型试剂中添加核酸酶抑制剂（如 RNase OUT）和非特异性结合阻断剂（如 BSA），减少 RNA 和蛋白的非特异性吸附，背景荧光降低约 30%，尤其适合高分辨率成像（如共聚焦显微镜下染色质细节观察）。

三、操作简便性与多场景适配

  1. 一步染色，兼容多种样本

适用于固定细胞爬片、组织冰冻 / 石蜡切片、染色体涂片等，无需透膜处理（固定时已破膜），直接滴加或浸泡染色 1~5 分钟后水洗即可，相比免疫荧光的多步操作（封闭、抗体孵育等）节省 2~3 小时。

2.高通量与自动化兼容

工作液黏度适中，可适配自动染色机或液体工作站（如 96 孔板批量染色），每孔加样量精准（如 100 μL / 孔），适合药物筛选（如细胞核形态变化的高通量检测）。

四、光谱特性与多色实验兼容性

  1. 蓝色荧光的核定位价值

激发 / 发射波长 358/461 nm，与绿色（FITC）、红色（Texas Red）等荧光探针光谱无重叠，在多色实验中作为核标记参照（如 DAPI+GFP - 微管蛋白 + Alexa Fluor 594 - 肌动蛋白），辅助亚细胞定位分析。

2.流式细胞术的 DNA 定量支持

固定细胞经即用型 DAPI 染色后，可通过流式细胞仪检测 DNA 含量，区分 G1/S/G2 期，且预配置试剂的荧光强度均一性好（CV<8%），数据重复性优于自配溶液。

五、典型应用场景

  1. 病理学与组织形态学

肿瘤组织切片中标记细胞核，计算增殖指数（如 Ki-67 + 细胞 / DAPI + 细胞比例）；神经退行性疾病样本中通过 DAPI 核碎裂评估细胞凋亡（如阿尔茨海默病海马区神经元损伤）。

2.细胞生物学与遗传学

细胞分裂中期染色体 DAPI 染色，进行核型分析（如唐氏综合征的 21 号染色体三体检测）；免疫荧光实验中与特异性抗体共染，确定蛋白核定位（如 p53 蛋白入核检测）。

3.微生物与寄生虫研究

真菌（如白色念珠菌）或原生动物（如疟原虫）细胞核标记，辅助侵染机制研究（如弓形虫速殖子的核分裂观察）。

六、注意事项与延伸应用

活细胞标记限制：即用型 DAPI 为固定细胞专用（含透膜剂），活细胞核标记需选择 Hoechst 33342；若需活细胞染色，可购买活细胞专用的即用型 Hoechst 工作液。

荧光增强优化：染色后可搭配抗淬灭封片剂（如 DABCO），延长荧光保存时间（常温下信号维持 1~2 周），适合拍照或长期样本保存。

总结

即用型 DAPI 通过 “预配置 + 优化配方” 的设计，在保持 DAPI 经典核标记优势的基础上，显著提升了实验效率、染色重复性和信噪比，尤其适合需要批量处理样本、追求结果稳定性的科研场景（如高通量筛选、病理诊断或教学实验）。其 “即开即用” 的特性，让 DNA 标记从繁琐的试剂配制中解放出来，成为细胞与组织核染色的高效工具。

本文引用地址：https://www.med-life.cn/product/1296765.html

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