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RH421 膜电位荧光探针(近红外) 是一种快速响应的膜电位染料,广泛地用于神经元跨膜电位、突触活动和离子通道活动的检测。在神经母细胞瘤模型中,对于每 100 mV 电压的变化,它展示出了大于 20% 的荧光改变。
一、近红外光激发与发射的独特优势
组织穿透深度更深:近红外光(通常波长范围 700-1000nm)在生物组织中的散射和吸收较少(如水、血红蛋白、脂质等对近红外光的吸收较低),可穿透更深的组织(如活体动物的脑、心脏等器官),适用于活体成像或厚组织样本(如脑切片)的膜电位监测,减少信号衰减。
背景荧光干扰更低:生物组织的自发荧光主要集中在可见光区域(400-600nm),近红外光激发和发射时,自发荧光干扰显著降低,可提高成像的信噪比(SNR),使膜电位变化的信号更清晰。
二、膜电位敏感性与特异性
高灵敏度响应膜电位变化:RH421 可通过静电作用快速嵌入细胞膜,其荧光强度或光谱特性(如波长、偏振)会随细胞膜电位(如去极化或超极化)的变化而显著改变,能实时、动态监测细胞的电活动(如神经元动作电位、心肌细胞收缩节律等)。
细胞膜特异性定位:染料主要结合于细胞膜,而非细胞内其他细胞器,可特异性反映细胞膜电位的变化,减少细胞内环境(如 pH、离子浓度)对信号的干扰。
三、光学性能与实验适用性
光稳定性强:相比传统可见光区荧光染料(如 DiBAC4 (3)),RH421 在近红外区的光漂白速率较低,可承受更长时间的连续激发(如长时间动态成像),减少染料降解导致的信号衰减,适合长时间实时监测。
多色成像兼容性好:近红外发射波长(如 700nm 以上)与可见光区荧光染料(如绿色、红色荧光蛋白)的发射光谱重叠较少,可与其他荧光标记(如钙指示剂、细胞标志物)同步使用,实现多参数(如膜电位 + 钙信号 + 细胞定位)的联合检测。
四、细胞毒性与生物相容性
低细胞毒性:RH421 在实验浓度下对细胞的生理功能(如膜完整性、代谢活动)影响较小,适合用于原代细胞、神经元、心肌细胞等敏感细胞的长期培养和功能研究,减少染料本身对细胞电活动的干扰。
水溶性与膜通透性平衡:染料具有适当的亲脂性,可快速透过细胞膜,同时保持一定的水溶性,避免在细胞内过度聚集导致的荧光淬灭,确保信号的稳定性和可靠性。
五、应用场景的广泛性
神经科学研究:用于监测神经元网络的电活动(如脑片神经元动作电位传导、活体动物脑区功能成像),结合光遗传学技术可研究神经元兴奋与抑制的动态变化。
心血管疾病研究:实时检测心肌细胞的动作电位时程、心律失常等,评估药物对心脏电生理的影响(如抗心律失常药物筛选)。
肿瘤细胞电生理研究:部分肿瘤细胞的膜电位异常与恶性表型相关,RH421 可用于分析肿瘤细胞的电生理特征,为癌症诊断或治疗提供新靶点。
总结
?RH421 膜电位荧光探针(近红外)的核心优势在于结合了近红外光学特性与高膜电位敏感性,在深部组织成像、低背景干扰、多参数联合检测等场景中表现突出,尤其适合需要在活体或复杂组织环境中研究细胞电生理活动的实验。使用时需注意优化染色浓度、激发光强度等参数,以获得最佳的信号采集效果。
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