?Di-8-ANEPPS 膜电位荧光探针（近红外） 属于 ANEP 染料家族，可以用来测定快速膜电位改变。ANEP 染料是一类能够快速反应膜电位变化的染料，它们的光学反应能够快速检测细胞中瞬时跨膜电位的改变，可以证明膜电势依赖激发光谱的转换，这种特性可以通过激发率的改变检测膜电势的改变。ANEP 染料在水溶液环境中具有微弱的荧光，在脂质环境中可以转变为强烈的荧光（例如细胞膜）。快速反应探针的操作通过改变电子结构从而激发它们的荧光属性以适应周围电场的改变，它们的光学反应能够快速检测可兴奋细胞，例如单神经元、心肌细胞和完整大脑中毫秒跨膜电位的改变。由于它的磺化基团，Di-8-ANEPPS 膜电位荧光探针（近红外） 比其他 ANEPP 染料更少受细胞内化的影响且具有更强的亲脂性，因此更适合于长期膜电位研究。此外，Di-8-ANEPPS 膜电位荧光探针（近红外） 比 Di-4-ANEPPDHQ 膜电位荧光探针（近红外） 具有更高的光稳定性。

1. 近红外光谱特性，适配深层成像与低背景检测

Di-8-ANEPPS 的近红外激发 / 发射光谱是其最突出的优势之一，完美契合生物成像的 “光学窗口” 需求：

• 光谱参数适配性：其激发波长（Ex）约为 730-750 nm，发射波长（Em）约为 780-820 nm，处于近红外光区（NIR）。这一波段的光在生物组织中穿透力更强，能有效减少细胞 / 组织对光的吸收（主要避开血红蛋白、水的强吸收峰）和自发荧光干扰（生物分子的自发荧光多集中在可见光区）。

• 应用价值：相较于绿色荧光探针（如 DiBAC?(3)），Di-8-ANEPPS 可用于 ** thicker 样本的深层成像 **，例如心肌组织切片、神经组织块、甚至小型模式生物（如斑马鱼胚胎）的在体膜电位监测，而无需过度依赖样本透明化处理。同时，低自发荧光背景大幅提升了信噪比（S/N），使微弱的膜电位变化信号更易被捕捉。

2. 特异性锚定细胞膜，信号定位精准

Di-8-ANEPPS 具有极强的膜靶向性，其化学结构决定了它能稳定结合于细胞膜的磷脂双分子层：

• 探针分子一端的长链烷基氨基（dioctylamino）具有疏水性，可嵌入细胞膜的疏水核心；另一端的羧酸钠基团带有负电荷，能与细胞膜表面的亲水头基相互作用，形成 “锚定” 效应。

• 这种结合方式使其严格局限于细胞膜区域，荧光信号集中在细胞边界，避免了胞内游离探针导致的信号弥散。对于研究细胞膜电位的区域特异性变化（如神经元轴突、树突的电位差异，心肌细胞闰盘的电传导）至关重要，信号定位精度远优于部分非特异性膜电位探针。

3. 荧光响应快速、可逆，适配高频动态监测

作为 “快响应型” 膜电位探针，Di-8-ANEPPS 的信号变化与膜电位波动几乎同步，且具有良好的可逆性：

• 响应速度极快：其荧光强度 / 波长随膜电位变化的响应时间仅为微秒级（μs），能够精准追踪细胞兴奋性相关的快速电位变化，例如神经元的动作电位（持续时间 1-10 ms）、心肌细胞的快反应动作电位，是研究 “高频电活动” 的理想工具。

• 信号可逆无疲劳：膜电位的去极化（荧光增强）与超极化（荧光减弱）过程可对应荧光信号的可逆循环，多次电位波动后信号无明显衰减，适合长时间（分钟至小时级）的动态监测（如药物作用下离子通道活性的持续变化）。

4. 对活细胞毒性低，生物相容性优异

Di-8-ANEPPS 对真核活细胞的生理状态干扰极小，生物相容性显著优于部分早期膜电位探针：

• 其膜嵌入机制温和，不破坏细胞膜的完整性，也不显著影响膜上离子通道（如钠、钾、钙通道）的正常功能。

• 在常规工作浓度（0.5-5 μM）下，对细胞存活率、增殖能力及代谢活性无明显抑制，可用于敏感细胞（如原代神经元、心肌细胞）的长期培养与成像，避免了因探针毒性导致的实验结果偏差。

5. 多模态检测兼容，适配多种实验场景

Di-8-ANEPPS 的特性使其可适配从单细胞到组织、从静态检测到动态成像的多种实验模式：

• 检测设备兼容性广：可与荧光显微镜（共聚焦、双光子显微镜，尤其双光子激发可进一步提升深层成像效果）、流式细胞仪、高速荧光成像系统（如钙成像与膜电位成像同步设备）适配，无需特殊定制光谱模块。

• 研究对象覆盖全：

  • 单细胞层面：可检测神经元、心肌细胞、胰岛 β 细胞等可兴奋细胞的动作电位或静息电位变化；

  • 组织层面：可用于心肌切片的电传导映射、脑片的神经网络电活动监测；

  • 个体层面：可用于斑马鱼等小型模式生物的在体心脏或神经电活动成像。

• 实验目的灵活：涵盖离子通道药物筛选、心律失常机制研究、神经环路兴奋性分析、细胞凋亡早期膜电位变化监测等多个方向。

6. 化学性质稳定，易于储存与操作

Di-8-ANEPPS 具有良好的化学稳定性，降低了实验操作门槛：

• 商品化试剂多为粉末或溶解于 DMSO 的储备液，在 - 20℃避光、密封条件下可长期储存（粉末状态保质期通常 1-2 年），反复冻融对其活性影响较小。

• 负载过程简单：无需透化剂，仅需将探针加入细胞 / 组织培养体系中，孵育 10-30 分钟即可完成膜结合，操作流程标准化，结果重复性高。

Di-8-ANEPPS 的核心优势在于 **“近红外光谱的深层成像能力” 与 “膜靶向的精准信号定位”“快响应的动态追踪特性” 三者的结合 **，同时兼具低毒性、多场景适配、稳定易操作等优点。尽管其相较于基因编码膜电位指示剂的细胞特异性稍弱，且需外源负载，但在 “非侵入性深层组织成像”“快速电活动追踪” 等场景中，仍是目前性价比与实用性俱佳的优选探针，广泛应用于神经科学、心血管生理学及药物研发领域。

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