高效型 PE-Annexin V/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒(橙红色,远红外)提供了一种通过标记早期凋亡细胞(橙红色)和坏死或晚期凋亡的细胞(远红)检测细胞凋亡水平的快速简便地方法。
Annexin V(膜联蛋白-V)是一种分子量为 35~36 KD 的 Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,可与磷脂酰丝氨酸 (PS) 选择性结合。磷脂酰丝氨酸 (PS) 主要分布在细胞膜内侧,即与细胞质相邻的一侧在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面,暴露在细胞外环境中,此时,使用藻红蛋白 PE 标记的 Annexin V,即 Annexin V-PE,与外翻的磷脂酰丝氨酸 (PS) 结合,就可用流式细胞仪或荧光显微镜直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。对于坏死、晚期凋亡或者损伤的细胞,由于细胞完整性已经被破坏,Annexin V-PE 则可以进入胞浆与处于磷脂层内侧的 PS 结合,从而使坏死细胞呈现出橙红色荧光。Annexin V-PE 可以与部分非渗透性的细胞核染料 (7-AAD/PI) 等联合使用,区分处于不同凋亡时期的细胞。
一、PE(藻红蛋白)荧光染料的优势(橙红色荧光)
高荧光强度与稳定性
PE 是从红藻中提取的天然荧光蛋白,具有极高的量子产率(荧光效率),荧光信号强,即使在低表达水平下也能清晰检测,适合微量样本或弱信号分析。
化学性质稳定,不易光漂白,在激光激发下可持续发光,适合长时间活细胞动态观察或多色荧光实验。
光谱特性适配性强
最大激发波长约 488nm(可被蓝光或氩离子激光器激发),发射峰在 575nm 左右(橙红色荧光),与常见流式细胞仪或荧光显微镜的检测通道(如 PE 通道)高度匹配,无需特殊设备即可实现高效检测。
与其他荧光染料(如远红外的 RedNucleus Ⅱ)的光谱重叠少,便于多色荧光标记时的信号分离,减少串色干扰,适合复杂样本的多参数分析(如同时检测凋亡、细胞周期或其他标志物)。
生物相容性与标记特异性
PE 作为蛋白类荧光染料,对细胞毒性极低,可用于活细胞染色,避免因染料毒性影响细胞状态或凋亡进程。
与 Annexin V 结合后,特异性识别凋亡早期细胞表面暴露的磷脂酰丝氨酸(PS),标记效率高,背景信号低,能精准区分正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞。
二、RedNucleus Ⅱ 荧光染料的优势(远红外荧光)
远红外光谱的独特优势
发射波长位于远红外区域(通常 > 650nm),相比可见光染料,具有更低的组织自发荧光干扰(生物样本在远红外区的背景荧光弱),尤其适合组织切片、厚样本或活体成像,提高检测信噪比。
远红外光穿透性强,在细胞或组织中散射少,可深度穿透样本,适用于三维细胞模型或动物活体实验中的凋亡检测。
细胞核标记的特异性与高效性
RedNucleus Ⅱ 是一种核酸结合染料,可特异性嵌入细胞核 DNA/RNA,对坏死细胞或凋亡晚期细胞的细胞核具有高亲和力(因凋亡晚期或坏死细胞的细胞膜通透性增加,染料更易进入),通过染色强度差异区分坏死细胞与正常 / 早期凋亡细胞。
荧光信号稳定,可抵抗核酸酶降解,长时间保持细胞核染色效果,适合多步骤实验或延时成像。
与 PE 的光谱互补性
远红外发射峰与 PE 的橙红色荧光无重叠,在流式细胞术或荧光显微镜下可通过不同通道独立检测,实现 “双参数凋亡分析”:PE-Annexin V 标记早期凋亡,RedNucleus Ⅱ 标记坏死或晚期凋亡,精准划分细胞凋亡阶段(正常细胞、早期凋亡、晚期凋亡 / 坏死)。
三、试剂盒整体应用优势
双参数检测提升准确性
通过 PE-Annexin V(早期凋亡)和 RedNucleus Ⅱ(晚期凋亡 / 坏死)的组合,可在单细胞水平上全面区分细胞凋亡的不同阶段,避免单一染料导致的误判(如坏死细胞对 Annexin V 的非特异性结合)。
多场景适用性
适用于流式细胞术、荧光显微镜、高内涵筛选等多种技术平台,既可进行高通量细胞群体分析,也可实现单个细胞的形态学观察。
高效型设计优化实验流程
染料标记效率高,染色步骤简便,无需复杂洗涤或预处理,适合高通量筛选或快速检测,同时减少实验误差。
该试剂盒通过 PE 与远红外 RedNucleus Ⅱ 的协同作用,在保持高特异性的同时,兼顾了信号强度、光谱分离度和复杂样本适应性,尤其适合需要深度检测或多参数分析的凋亡研究。
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