FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒（绿色，红色）提供了一种通过标记早期凋亡细胞（绿色）和坏死或晚期凋亡的细胞（红色）快速简便地检测细胞凋亡水平的方法。Annexin V（膜联蛋白-V）是一种分子量为 35~36 KD 的 Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，可与磷脂酰丝氨酸 (PS) 选择性结合。磷脂酰丝氨酸 (PS) 主要分布在细胞膜内侧，即与细胞质相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面，暴露在细胞外环境中。此时，使用绿色荧光探针 FITC-Annexin V 与外翻的磷脂酰丝氨酸 (PS) 结合，就可用流式细胞仪或荧光显微镜直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。

FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒是检测细胞凋亡的经典工具，其优势主要源于两种荧光染料的协同作用 ——FITC-Annexin V 对早期凋亡细胞膜磷脂酰丝氨酸（PS）外翻的特异性识别，以及 PI 对晚期凋亡 / 坏死细胞 DNA 的选择性染色。这种双染体系通过 “绿色 + 红色” 荧光信号的组合，实现了凋亡细胞的多阶段精准分型。

1. 双信号协同，覆盖凋亡全周期动态监测

• FITC-Annexin V（绿色荧光）：

• 早期凋亡特异性标记：PS 正常位于细胞膜内侧，凋亡早期 PS 外翻至细胞膜表面，Annexin V（Ca2?依赖性磷脂结合蛋白）可高亲和力结合 PS，FITC 标记后发射绿色荧光（激发 / 发射约 495/519 nm），仅标记早期凋亡细胞（Annexin V?/PI?）。

• PI（碘化丙啶，红色荧光）：

• 晚期凋亡 / 坏死标记：PI 为核酸染料，细胞膜完整时无法进入细胞，仅在细胞膜通透性增加（晚期凋亡或坏死）时嵌入 DNA，发射红色荧光（激发 / 发射约 535/617 nm），标记 Annexin V?/PI?（晚期凋亡）和 Annexin V?/PI?（坏死）细胞。

• 核心优势：通过四象限分析法（Annexin V vs. PI），可明确区分活细胞（双阴性）、早期凋亡（Annexin V?/PI?）、晚期凋亡（双阳性）和坏死细胞（Annexin V?/PI?），避免单色染色无法区分凋亡阶段的缺陷。

2. 高特异性与灵敏度，减少假阳性干扰

• Annexin V 的 PS 靶向性：

• 仅识别凋亡早期 PS 外翻事件，与坏死细胞的非特异性膜损伤不同，避免因细胞机械损伤或毒性刺激导致的假阳性（如 PI 单染时坏死细胞与凋亡细胞无法区分）。

• PI 的 DNA 选择性结合：

• 依赖细胞膜破损进入细胞，与 RNA 无结合力（实验中可加 RNase 去除 RNA 干扰），相比其他核酸染料（如 DAPI）更适合活细胞凋亡检测（DAPI 可穿透活细胞膜）。

• 双染排除背景干扰：

• 活细胞因 PS 未外翻且膜完整，呈现双阴性；早期凋亡细胞仅 Annexin V 阳性，排除 PI 非特异性结合；晚期凋亡与坏死细胞通过 Annexin V 是否阳性进一步区分，结果更可靠。

3. 活细胞兼容与快速检测，适合动态过程研究

• 无需固定 / 透膜处理：

• 直接将染料加入活细胞培养基中孵育 15-20 分钟即可检测，避免固定剂（如甲醛）对细胞膜结构的破坏，保留细胞真实凋亡状态，适合追踪药物处理后数小时内的凋亡动态（如 30 分钟至 6 小时的早期凋亡峰值）。

• 操作流程简便：

• 一步法染色后无需洗涤（部分试剂盒支持），直接上流式细胞仪或荧光显微镜观察，相比 TUNEL 法（检测 DNA 断裂）节省 2-3 小时实验时间，适合高通量筛?。ㄈ缁衔锏蛲龌钚陨秆。?/p>

4. 兼容流式与荧光成像，量化分析灵活高效

• 流式细胞术精准分型：

• FITC 和 PI 信号可分别通过流式细胞仪的 FITC 通道（绿色）和 PI 通道（红色）检测，通过散点图直接计算各阶段细胞比例（如早期凋亡率 = Annexin V?/PI?细胞占比），数据可量化且重复性高（CV<5%）。

• 荧光显微镜直观观察：

• 绿色荧光（Annexin V）显示细胞膜表面点状或环状染色，红色荧光（PI）显示细胞核浓染，结合共聚焦成像可观察单个细胞的凋亡形态学特征（如细胞膜出泡、核固缩），适合机制研究中的定性验证。

5. 多色实验兼容性强，拓展凋亡相关机制研究

• 联合其他探针联用：

• Annexin V/PI+JC-1：同步检测凋亡阶段与线粒体膜电位丧失的时序关系；

• Annexin V/PI+Ki-67：区分增殖细胞与凋亡细胞的比例。

• 可与线粒体膜电位探针（如 JC-1）、活性氧探针（如 DCFH-DA）或细胞周期染料（如 DAPI）同时使用，分析 “线粒体功能 - 凋亡启动”“氧化应激 - 凋亡信号” 等关联机制。例如：

• 光谱优化减少串扰：

• FITC（519 nm）和 PI（617 nm）的发射光谱间隔超过 90 nm，流式检测时可通过滤光片有效分离，荧光成像时无需担心信号重叠，适合多通道荧光系统（如激光共聚焦显微镜）。

6. 结果稳定且适用范围广，兼容多种样本类型

• 细胞类型普适性：

• 适用于贴壁细胞（如 HeLa、293T）、悬浮细胞（如 Jurkat、PBMC）、原代细胞（如神经元、免疫细胞）及肿瘤组织消化后的单细胞悬液，无需针对不同细胞优化染色条件。

• 样本保存灵活性：

• 染色后样本在 4℃避光条件下可稳定 2-4 小时，适合批量处理；流式检测前若需暂时保存，可加入固定液（如 1% 多聚甲醛）维持细胞状态，不影响双染信号强度。

FITC-Annexin V/PI 试剂盒凭借 “双信号定位 + 全周期覆盖” 的设计，成为细胞凋亡检测的金标准工具，尤其在需要精确区分凋亡阶段、动态监测凋亡进程或联合其他细胞功能分析的实验中具有不可替代的优势，广泛应用于肿瘤生物学、药物毒理学、免疫学等领域的研究。

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