Calcein AM 细胞活力检测试剂盒（绿色） 是一种可以穿透细胞膜检测细胞内 pH 的荧光染料。Calcein AM 细胞活力检测试剂盒（绿色） 没有荧光，进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成 BCECF，从而被滞留在细胞内 在适当的 pH 值条件下可以被激发形成绿色荧光，最大激发波长和发射波长因 pH 的不同而有所不同，最大激发波长在 503 nm 左右，最大发射波长在 520 nm 左右，实际检测时推荐使用的激发波长为 488 nm，发射波长为 535 nm。

Calcein AM 细胞活力检测试剂盒（绿色） 不仅被广泛用于哺乳动物细胞的研究，也用于动物组织、植物细胞、细菌和酵母等的体内 pH 水平检测。此外，在细胞内有 pH 变化的细胞毒性、细胞凋亡、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等过程中 Calcein AM 细胞活力检测试剂盒（绿色） 也被广泛应用。

一、Calcein AM 的分子设计与作用机制

Calcein AM（钙黄绿素乙酰甲酯）是一种细胞渗透性荧光探针，其核心优势源于独特的化学结构设计：

• 非极性前体形式：Calcein AM 的乙酰甲酯基团（-COOCH?）使其具有脂溶性，可自由穿过活细胞膜；进入细胞后，被胞内酯酶水解为极性强的 Calcein（钙黄绿素），无法透出细胞，从而在活细胞内积累绿色荧光。
• 钙依赖性荧光增强：Calcein 与胞内钙离子（Ca2?）结合后，荧光强度增强 100 倍以上，其绿色荧光（激发 / 发射约 490/515 nm）直接反映细胞内酯酶活性和钙稳态，是活细胞活力的特异性指标。

二、荧光染料的核心优势

1. 高活细胞选择性与低背景信号

仅活细胞显色：死细胞因胞内酯酶失活或细胞膜通透性增加，无法水解 Calcein AM，或 Calcein 被外排，因此荧光信号几乎仅来自活细胞（背景荧光＜活细胞的 5%）。

自发荧光干扰低：Calcein 的绿色荧光光谱与细胞自发荧光（如脂褐素的蓝色荧光）重叠少，在流式细胞术或荧光显微镜下易区分，尤其适合富含自发荧光的组织样本（如肝脏、脂肪细胞）。

2. 低细胞毒性与生理兼容性

标记浓度安全范围广：常用工作浓度为 1-5 μM，即使在 10 μM 下孵育 24 小时，对细胞增殖（如 HeLa 细胞）和功能（如神经元电活动）无显著影响（MTT 法验证细胞活力＞95%）。

无代谢干扰：乙酰甲酯基团水解后生成的 Calcein 为惰性分子，不参与细胞代谢途径，也不与核酸、蛋白质结合，适合原代细胞、干细胞等敏感样本的长期活力监测。

3. 操作简便与快速检测

一步染色无需洗涤：细胞与 Calcein AM 工作液在 37℃孵育 15-30 分钟后，直接观察或检测，未进入细胞的探针可被培养基自然稀释，减少操作步骤（尤其适合高通量筛选）。

跨细胞类型适用性：可高效标记哺乳动物细胞（如贴壁的成纤维细胞、悬浮的 PBMC）、昆虫细胞、植物细胞及部分微生物（如酵母），对悬浮细胞的标记效率＞98%，贴壁细胞＞95%。

三、光谱特性与多重检测兼容性

绿色荧光通道适配与多色联用

通用检测平台兼容：Calcein 的荧光光谱与 FITC、Alexa Fluor 488 一致，可使用 488 nm 激光或蓝光激发，适配流式细胞仪（FL1 通道）、荧光酶标仪（激发 / 发射 485/530 nm）及共聚焦显微镜。

多重染色无串扰：与红色荧光探针（如 PI、EthD-1）联用时，可同步检测活细胞（Calcein 绿色）与死细胞（PI 红色），或与近红外探针（如 Cy5）结合，实现活细胞活力 + 标志物表达的多参数分析（光谱分离度＞100 nm）。

四、应用场景的深度适配

1. 细胞治疗与药物筛选

CAR-T 细胞活力评估：在细胞制备过程中，Calcein AM 标记后通过流式细胞术快速检测 CAR-T 细胞活率（如冻存复苏后活率＞80% 视为合格），比台盼蓝更客观且可自动化分析。

高通量药物毒性筛选：在 96/384 孔板中，加入 Calcein AM 后 1 小时内即可通过荧光酶标仪读取数据，筛选抗肿瘤药物的细胞毒性（IC??计算误差＜10%），适合新药研发初期的大规模筛选。

2. 干细胞与组织工程

干细胞活性监测：间充质干细胞在三维支架中培养时，Calcein AM 可穿透支架材料标记活细胞，通过共聚焦显微镜三维重建观察细胞分布与活力（如支架中心区域活细胞占比＞70%），为组织工程构建提供实时数据。

胚胎细胞活力检测：在体外受精（IVF）中，Calcein AM 标记人类卵母细胞后，荧光强度与胚胎发育潜能正相关（优质囊胚的荧光强度比劣质胚胎高 2-3 倍），可辅助筛选优质胚胎。

3. 神经科学与活细胞成像

神经元活力动态监测：原代培养的神经元经 Calcein AM 标记后，可在电生理记录过程中同步观察细胞活力，荧光强度变化与神经元存活状态一致（如缺氧损伤后 30 分钟内荧光显著减弱）。

长时间活细胞追踪：Calcein 的荧光稳定性强，在活细胞工作站中可连续成像 24 小时（荧光衰减＜20%），适合观察细胞迁移、分化等动态过程（如癌细胞侵袭实验）。

五、安全性与储存优势

• 无生物危害：Calcein AM 无放射性或基因毒性，代谢产物 Calcein 为水溶性低毒物质，实验废液可按普通化学废弃物处理。
• 稳定的储存性能：试剂盒中的 Calcein AM 母液（1 mM DMSO 溶液）在 - 20℃可保存 12 个月，工作液现配现用，避免反复冻融影响标记效率；常温下母液可稳定存放 1 周，适合实验室日常使用。

Calcein AM 通过 “脂溶性前体 - 胞内酯酶激活” 的设计，实现了活细胞的特异性荧光标记，其高选择性、低毒性及快速检测能力使其成为细胞活力评估的金标准工具。与传统方法（如台盼蓝、MTT）相比，Calcein AM 不仅能定量活细胞比例，还可通过荧光强度动态反映细胞生理状态，尤其适合活细胞实时成像、高通量筛选及复杂样本（如三维培养、组织切片）的活力分析，为细胞生物学研究提供了精准且便捷的解决方案。

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