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Calcein AM/PI 活死细胞双染试剂盒（绿色，红色） 是一种检测动物细胞死活的双荧光染色试剂盒。试剂盒内的两种探针可分别通过测定细胞内酯酶活性和质膜完整性从而反映细胞活力，与相同用处的台盼蓝相比，更快捷安全且灵敏度更高。
本试剂盒可用于荧光显微镜、流式细胞仪、酶标仪以及其他荧光检测系统，可应用于大多数的真核哺乳动物细胞，包括贴壁细胞核的某些组织，但不适用于真菌和酵母。
一、Calcein AM（绿色荧光染料）的核心优势
与 Calcein AM/EthD-Ⅰ 系统中的 Calcein AM 特性基本一致，具体包括：
活细胞特异性标记：脂溶性 AM 酯形式穿透活细胞膜，被胞内酯酶水解为水溶性 Calcein，与 Ca2?结合后发出绿色荧光（490/515 nm），仅活细胞因酯酶活性被染色。
低细胞毒性与稳定性：染色后细胞可继续培养 48 小时以上，荧光信号抗光淬灭能力强，适合长时程观察。
操作简便：一步染色无需洗涤，兼容贴壁细胞、悬浮细胞及多种物种（如哺乳动物、昆虫细胞）。
二、PI（碘化丙啶，红色荧光染料）的独特优势
死细胞专属标记，高膜通透性依赖
膜破损识别机制：PI 为带正电荷的核酸染料，无法穿透完整细胞膜，仅能进入死细胞（膜通透性增加），与 DNA/RNA 结合后发出红色荧光（激发 / 发射约 535/617 nm），活细胞因膜完整性被排斥，实现 “活绿死红” 的清晰区分。
荧光增强效应：与核酸结合后荧光强度提升约 20 倍，未结合时背景极低，死细胞染色对比度显著，尤其适合低死细胞比例样本的检测（如细胞凋亡早期筛?。?。
核酸结合特异性与抗干扰能力
DNA 优先结合特性：PI 与 DNA 的结合力强于 RNA（亲和力高 3 倍），在 RNA 酶处理后仍可特异性标记 DNA，减少 RNA 干扰，适合细胞核结构观察或细胞周期分析（需配合固定破膜步骤）。
血清兼容性：在 10% 胎牛血清中染色效率稳定（仅降低约 10%），可直接用于含血清培养基的细胞毒性实验，无需额外洗涤去除蛋白。
光谱兼容性与多色实验支持
与绿色荧光染料匹配：PI 的红色荧光与 Calcein AM 的绿色荧光光谱分离度＞100 nm，串扰极低，也可与 FITC、Alexa Fluor 488 等绿色探针同步使用，例如搭配线粒体绿色染料（如 MitoTracker Green）时，可同时显示细胞死活与线粒体分布。
适配流式与显微平台：流式检测中，PI 可通过 FL3 通道（610 nm 带通滤光片）采集，与 Calcein AM 的 FL1 通道分离，适合高通量活死细胞计数（误差率＜5%）。
三、双染组合的协同优势
活死细胞可视化与量化分析兼顾
直观形态学观察：荧光显微镜下，活细胞呈均匀绿色，死细胞因 PI 进入细胞核呈现红色荧光聚集（核染色质浓缩时荧光更亮），可直接判断细胞死亡类型（如凋亡、坏死）。
量化数据支持：流式细胞术分析时，Calcein AM?/PI?为活细胞，Calcein AM?/PI?为死细胞，通过双参数散点图可精确计算存活率，适用于药物浓度梯度实验（如 IC??测定）。
广泛应用场景适配
细胞冻存与复苏评估：冻存液中直接加入双染试剂，10 分钟内即可判断复苏细胞活性，比台盼蓝染色更灵敏（可检测早期死亡细胞）。
微生物活性检测：对酵母菌、细菌等单细胞生物，Calcein AM 可标记代谢活跃的活菌，PI 标记死菌，用于益生菌活性筛选或抗生素药敏实验。
组织切片活死细胞定位：在冰冻或石蜡切片中，双染可穿透 5-10 μm 厚度组织，显示特定区域细胞死活状态（如肿瘤组织中心坏死区的 PI?细胞）。
?Calcein AM/PI 双染试剂盒通过 “活细胞代谢标记 + 死细胞核酸嵌入” 的机制，实现了活死细胞的快速区分，兼具 PI 的低成本、DNA 特异性及 Calcein AM 的低毒稳定性，尤其适合需要兼顾形态学观察与量化分析的场景（如细胞毒性初筛、微生物活性检测）。尽管 PI 在荧光亮度和长期染色毒性上略逊于 EthD-Ⅰ，但其经济性和广谱适用性使其成为基础科研中活死细胞检测的经典组合。
本文引用地址：https://www.med-life.cn/product/1296587.html
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