5-乙炔基-2’-脱氧尿苷（EdU），荧光染料在科研领域中的优势

2025-09-04

?5-乙炔基-2’-脱氧尿苷（EdU）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶 (T) 渗入正在复制的 DNA 分子中，通过基于 5-乙炔基-2’-脱氧尿苷（EdU）的乙炔基与YF 系列荧光染料标记的叠氮化物 (Azide) 通过一价铜离子催化下发生特异性反应，形成稳定的三唑环，该反应为点击化学反应 (Click Reaction)。该反应可快速检测细胞 DNA 复制活性，准确检测细胞增殖能力。

与 BrdU 检测方法相比，EdU 检测方法用量小得多，十分之一的用量即可获得与 BrdU 检测试剂盒相同甚至更好的检测结果，而且小分子化学反应检测方法反应快、效率高，反应时间仅需几分钟，不需要 DNA 变性、蛋白酶处理、抗原抗体过夜孵育，能够更好地保护细胞形态，更简单、更灵敏、更快速、更准确。

5-乙炔基-2’-脱氧尿苷（EdU）适用于各种动物活体注射，稳定性较好，对活体无明显副作用，可将目标组织制备为石蜡或冰冻组织切片后检测，也适用于体外培养的细胞增殖检测。本产品系列适用于小鼠、大鼠及其他动物模型的各种组织器官（血管除外）的细胞增殖检测。

1. 操作简便，无需 DNA 变性

传统 BrdU 检测痛点：BrdU 需通过抗体免疫荧光检测，需用强酸 / 热变性 DNA 以暴露抗原表位，易破坏细胞结构和抗原完整性。
EdU + 荧光染料的优势：点击化学反应（CuAAC 反应）在温和条件下即可完成，无需 DNA 变性或剧烈处理。例如，Alexa Fluor 488 叠氮化物与 EdU 的乙炔基在铜离子催化下快速偶联，直接标记新合成 DNA，操作步骤减少 50% 以上，显著降低实验误差和细胞损伤风险。

2. 灵敏度高，适用于微量细胞检测

小分子标记效率：EdU 分子量仅为 BrdU 的 1/2（242 Da vs. 351 Da），掺入 DNA 后空间位阻小，荧光染料标记时不受组蛋白或 DNA 高级结构阻碍，标记效率提升 30%-50%。
低丰度信号捕获：荧光染料（如 Cy5）的荧光量子产率高，可检测到单个细胞中微量 EdU 掺入，尤其适合干细胞、循环肿瘤细胞（CTCs）等低数量细胞的增殖分析，或早期胚胎发育等低增殖速率的场景。

3. 信号稳定，抗淬灭能力强

光稳定性优化：现代荧光染料（如 Alexa Fluor 647）经过化学修饰，在激光共聚焦或流式检测中光淬灭速率比传统 FITC 降低 70%，可长时间观察活细胞增殖动态（如连续 48 小时实时成像）。
多重染色兼容性：荧光染料的发射波长覆盖 488-750nm 宽光谱（如 Alexa Fluor 488、555、647），可与 DAPI、GFP、RFP 等其他荧光标记同时使用，实现 “增殖 + 凋亡 + 细胞周期” 多指标共检测，且信号交叉干扰率＜5%。

4. 细胞毒性低，适合活细胞动态研究

代谢毒性降低：EdU 的乙炔基取代不影响 DNA 聚合酶识别，细胞摄入后对 S 期进程无显著干扰（IC50＞100μM），而 BrdU 可能因抗体结合导致 DNA 复制阻滞。
活细胞标记可行性：荧光染料与 EdU 的点击反应可在活细胞中进行（如使用膜透性铜螯合剂），无需固定即可实时标记增殖细胞，适用于追踪神经干细胞分化、肿瘤细胞迁移等动态过程。

5. 高通量与自动化兼容

多孔板与流式适配：荧光染料的检测信号均一性高，在 96/384 孔板中 CV 值＜8%，可直接通过荧光酶标仪或流式细胞仪进行高通量筛选。例如，EdU+Alexa Fluor 488 检测可在流式细胞仪上实现每秒 10,000 个细胞的快速分析，适合药物毒性筛选或 siRNA 文库筛选。
自动化流程适配：点击反应步骤可整合到液体工作站中，从细胞处理到荧光检测全流程自动化，减少人工操作误差，尤其适合大规模药物研发实验。

6. 组织兼容性与形态学保存

冰冻 / 石蜡切片适用：EdU 检测在组织切片中穿透力强（可穿透 50μm 厚切片），且点击反应不破坏抗原表位，可与 CD31、Ki67 等抗体共染色，用于肿瘤血管生成或组织再生研究。
超微结构保留：与 BrdU 的强变性处理相比，EdU 检测后细胞的电镜结构（如线粒体、内质网）保存完好，可结合荧光成像与电镜分析，实现细胞增殖的超微结构定位。

7. 安全性与环保优势

无放射性 / 低毒性：无需使用同位素（如 3H-TdR）或致癌性抗体（如 BrdU 抗体），荧光染料本身无生物毒性，废液处理简单，符合实验室安全规范。
试剂稳定性：荧光染料 - 叠氮化物偶联物在 - 20℃可稳定保存 12 个月以上，且点击反应对 pH（6.5-8.5）、温度（4-37℃）耐受性强，减少实验重复成本。

EdU 检测系统中的荧光染料通过点击化学与 DNA 合成标记结合，突破了传统增殖检测方法的局限性，在操作便捷性、灵敏度、多重检测兼容性等方面表现突出，尤其适用于活细胞动态追踪、高通量筛选及组织原位分析，已成为细胞增殖研究的主流工具之一。

本文引用地址：https://www.med-life.cn/product/1296761.html

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