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增强型 CCK-8 细胞增殖试剂盒,是一种基于 WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)显色反应的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
WST-8 是 MTT 的一种升级替代产品,和 MTT 或 MTT 类似产品如 XTT、MTS 等相比有明显的优点。首先,MTT 被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的甲臜不是水溶性的,需要有特定的溶解液来溶解;而 WST-8、XTT 和 MTS 产生的甲臜都是水溶性的,可以省去后续的溶解步骤,WST-8 产生的甲臜比 XTT 和 MTS 产生的甲臜更易溶解,WST-8 比 XTT 和 MTS 更加稳定,使实验结果更加稳定,WST-8 与 MTT、XTT 相比线性范围更宽,灵敏度更高。
WST-8 在电子耦合试剂存在的条件下,可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物 (formazan)。颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在 450 nm 波长处测定 OD 值,间接反映活细胞数量。
1. 更高的检测灵敏度与线性范围
微量细胞检测能力:增强型 CCK-8 试剂的荧光信号强度更高,可检测低至 100 个细胞的增殖情况,相比普通 CCK-8 试剂盒,对早期细胞增殖或低细胞密度样本的检测更为敏感,适用于干细胞研究、肿瘤细胞耐药性分析等需要精细检测的场景。
宽动态线性范围:荧光信号与细胞数量在更宽的浓度范围内(如 103–10?个细胞 / 孔)呈良好的线性关系,避免了因细胞密度过高或过低导致的信号饱和或失真,适合高通量筛选和复杂样本的定量分析。
2. 抗干扰能力强,背景信号低
特异性荧光发射:荧光染料的发射波长(通常为 430–490nm)经过优化,与细胞内自发荧光或培养基成分的吸收光谱错位,减少了背景干扰。例如,某些增强型试剂盒通过修饰 WST-8 结构,降低了与血清蛋白的非特异性结合,进一步降低背景值。
耐还原剂影响:普通 CCK-8 易受细胞培养体系中还原剂(如谷胱甘肽)的干扰,而增强型试剂通过分子结构改良,对还原剂的耐受性更强,在含有血清或抗氧化剂的培养基中仍能保持稳定的信号输出。
3. 操作简便,信号稳定性高
即加即测,无需换液:试剂可直接加入培养孔中,无需更换培养基或洗涤细胞,避免了因操作步骤繁琐导致的细胞损失或污染,适合自动化高通量实验(如多孔板检测仪)。
长时信号维持:荧光信号在加入试剂后 1–4 小时内保持稳定(部分产品可达 6 小时),相比普通 CCK-8 的吸光度检测(信号峰值通常在 30 分钟–1 小时),可灵活安排检测时间,减少实验时间压力。
4. 兼容性广,适用场景多样
多物种细胞与样本类型:适用于哺乳动物细胞、原代细胞、肿瘤细胞株、干细胞等,也可用于组织切片或细胞提取物的活性检测,甚至在低氧、药物处理等复杂实验条件下仍能保持稳定性能。
与其他检测方法兼容:荧光检测模式可与吸光度检测(OD 值)并行使用,提供双重验证;同时,试剂不含酚红等干扰物质,可兼容荧光蛋白(如 GFP、RFP)标记的细胞成像,满足多维度实验需求。
5. 安全性与环保性优势
无放射性 / 毒性:相比 MTT、XTT 等传统试剂(需使用 DMSO 溶解甲瓒产物,具有细胞毒性),增强型 CCK-8 的荧光染料为水溶性,无需有机溶剂处理,实验后废液可直接按普通生物废弃物处理,更安全环保。
长期保存稳定性:试剂在 4℃或 - 20℃下可稳定保存 6–12 个月,且溶解后不易氧化变质,减少了试剂浪费和实验重复成本。
6. 配套优化,数据可靠性高
预优化的实验体系:部分增强型试剂盒附带细胞裂解液、阳性 / 阴性对照品及标准化操作流程,可减少实验误差;例如,针对悬浮细胞或贴壁性差的细胞,提供专用的检测缓冲液,确保信号准确性。
批间一致性强:通过 HPLC 等手段严格控制染料纯度(≥98%),并优化生产工艺,使不同批次试剂的检测结果偏差小于 5%,适合长期重复实验或多中心研究
增强型 CCK-8 试剂盒的荧光染料通过结构改良和性能优化,在灵敏度、抗干扰性、操作便捷性等方面显著优于传统试剂,尤其适合需要高精度、高通量或复杂实验环境的细胞增殖与活性分析,为基础研究和药物开发提供了更可靠的工具。
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