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DualFluo 萤火虫/海肾萤光素酶双检测试剂盒,荧光染料在科研中的特异性

2025-08-29

真核基因表达调控研究常用的方法是进行报告基因的检测,生物发光法又是报告基因检测最常用的有效手段。萤光素酶能催化底物萤光素的转化,并发射出光子。该产品为萤火虫萤光素酶报告基因在哺乳动物细胞中的表达提供快速、灵敏、稳定的检测方法。能够检测最低 10-20 mol 的萤光素酶,在 10-14 至 10-20 mol 的酶浓度范围内呈很好的线性关系。

萤火虫萤光素酶分子量约 61 kDa 的蛋白,在 ATP、Mg2+ 和 O2 存在条件下,催化其底物甲虫萤光素氧化成氧化萤光素并发出波长是 560 nm 左右的萤光。海肾萤光素酶 (Renilla Luciferase) 是分子量约 36 kDa 的蛋白,在 O2 存在下,催化其底物腔肠素 (Coelenterazine) 氧化成 Coelenteramide 并放出波长 480 nm 左右的萤光。两种萤光均属于化学发光,可以用酶标仪的化学发光检测模块进行测定。

DualFluo 萤火虫/海肾萤光素酶双检测试剂盒利用双报告基因检测的方式,其中一种报告基因(如海肾萤光素酶报告基因)可作为内对照,可有效排除因外部因素导致的误差,如细胞数量,细胞状态,移液体积,细胞裂解效率等,以实现对实验数据的准确性和可靠性。本试剂盒主要可以应用于启动子、增强子、转录因子活性研究,miRNA 靶向研究,信号通路研究,蛋白质相互作用等。

  • 底物特异性:萤火虫萤光素酶特异性地催化萤光素(luciferin)氧化成氧代萤光素(oxyluciferin),在这个过程中发出波长为 560nm 左右的生物萤光;海肾萤光素酶则特异性地催化腔肠素(coelenterazine)氧化成腔肠酰胺(coelenteramide),发出波长为 465nm 左右的生物萤光。两种酶各自对其特定的底物具有高度特异性,不会交叉催化对方的底物。

  • 信号淬灭特异性:在检测过程中,当需要检测海肾萤光素酶的活性时,试剂盒中含有的物质能够特异性地抑制萤火虫萤光素酶催化萤光素发光。例如碧云天的双萤光素酶报告基因检测试剂盒中,海肾萤光素酶检测工作液加入后通过简单的混匀,就可以抑制 99.9% 以上的萤火虫萤光素酶催化的发光信号,从而确保后续检测到的荧光信号主要来自海肾萤光素酶对腔肠素的催化反应,大大提高了检测的精准性。

  • 内参校正特异性:海肾萤光素酶常被用作内参,它可以消除因孔间细胞数量、转染效率以及细胞生长状态不同等因素造成的影响,使得检测结果的准确性更高。这种内参校正作用具有特异性,能够针对实验中可能出现的非特异性因素进行校正,而不影响对目标基因表达相关的萤火虫萤光素酶活性的检测和分析。

本文引用地址:https://www.med-life.cn/product/1296846.html

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