PikoGreen 核酸荧光染料，荧光染料在科研中的特异性

2025-08-28

PikoGreen 核酸荧光染料是荧光检测 dsDNA 并进行定量的一种产品，这种方法非常灵敏。常用于分子生物学技术中 cDNA 文库的构建、亚克隆的 DNA 片段纯化及应用，比如进行 DNA 定量、产物扩增和引物的进一步检测。

常规的 DNA 含量的检测方法是在 260 nm 处测其吸光值，主要缺点是核苷酸、单链核酸和蛋白质对信号的影响很大，并且还会受到核酸制备过程中污染物的干扰，无法区分 DNA 和 RNA，而且这种方法不灵敏（5 μg/mL dsDNA 溶液 A260 = 0.1）。PikoGreen 核酸荧光染料只有与 dsDNA 结合后才发出荧光，并且所发荧光强度与 DNA 浓度成正比。PikoGreen 核酸荧光染料可以检测出 25 pg/mL~1000 ng/mL 范围内的 dsDNA，且线性关系较好 (R2 > 0.99)。对于总体积为 200 μL 的检测体系，1 mL 规格可检测 2000 个样本。

PikoGreen 核酸荧光染料的特异性主要体现在对双链 DNA（dsDNA）的高度选择性结合，具体表现如下：

1. 仅与 dsDNA 结合发光，对其他核酸形式低响应

对 ssDNA 和 RNA 的特异性抑制：
当与单链 DNA（ssDNA）或 RNA 结合时，PikoGreen 的荧光强度极低（几乎不发光）。例如，在等摩尔浓度的 RNA 存在时，其对 dsDNA 的结合特异性显著，仅识别 dsDNA 的双螺旋结构，而不会被单链核酸干扰。
不受单体核苷酸影响：
游离的核苷酸（如 dNTP、NTP）无法激活 PikoGreen 的荧光，避免了核酸降解产物或反应体系中残留核苷酸的干扰。

2. 无序列依赖性，适配多种 dsDNA 结构

不依赖碱基序列或 GC 含量：
无论 dsDNA 的碱基组成（如 AT/GC 比例）或序列如何，PikoGreen 均能以相似的效率结合，保证了不同来源 DNA（如基因组 DNA、PCR 产物、质粒等）定量的一致性。
兼容不同长度的 dsDNA：
从短链寡核苷酸（如 10 bp 以上）到长链基因组 DNA，均可被特异性识别，适用范围广泛。

3. 抗常见污染物干扰，维持特异性结合

耐受反应体系中的杂质：
对盐（如 NaCl）、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂（如 SDS）、蛋白质（如 BSA）或琼脂糖等常见污染物具有较高耐受性。例如，在 PCR 产物直接定量时，无需纯化即可排除反应体系中引物、dNTP 等杂质的影响，确保仅针对 dsDNA 的特异性检测。

PikoGreen 的高特异性使其在以下场景中表现突出：

复杂样品中 dsDNA 的精准定量：如血清、细胞裂解液、环境样本等含有多种核酸或杂质的体系。
PCR 产物直接检测：无需纯化即可排除引物二聚体（单链或短双链结构）的干扰，仅定量目标 dsDNA 产物。
区分 dsDNA 与其他核酸形式：例如在 RNA 提取实验中，可特异性检测残留的 dsDNA 污染。

这种 “仅识别 dsDNA 双螺旋结构” 的特性，使其成为核酸定量中可靠性较高的工具。

本文引用地址：https://www.med-life.cn/product/1296387.html

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