MarveBlue X-Green II dsDNA HS 定量试剂盒效能等同于 Quant-iT? PicoGreen? dsDNA Assay Kits，X-Green II 是荧光检测 dsDNA 并进行定量的一种产品，这种方法非常灵敏。常用于分子生物学技术：cDNA 文库的构建、亚克隆的 DNA 片段纯化及应用，比如进行 DNA 定量、产物扩增和引物的进一步检测。常规的 DNA 含量的检测方法是在 260 nm 处测其吸光值。这种方法的主要缺点是核苷酸、单链核酸和蛋白质对信号的影响很大，并且还会受到核酸制备过程中污染物的干扰，无法区分 DNA 和 RNA，而且这种方法不灵敏（5 μg/mL dsDNA 溶液 A260 = 0.1）。X-Green II 定量方法简单、方便，成为生物制品残留 DNA 检测的标准。

X-Green II 只有与 dsDNA 结合后才发出荧光，并且所发荧光强度与 DNA 浓度成正比 X-Green II双链 DNA 定量试剂盒升级版可以检测出 25 pg/mL~1000 ng/mL 范围内的 dsDNA，且线性关系较好 (R2 > 0.99)。

一、分子结构的精准适配与信号放大机制

1. 双嵌合结构设计
   染料采用苯并咪唑 - 花菁共轭体系，通过两个刚性平面结构分别嵌入 dsDNA 的大沟和小沟，形成双重锚定。这种设计使其与 dsDNA 的结合常数（Kd=8.7×10? M?1）比 SYBR Green I（Kd=2.1×10? M?1）高 4 倍以上，尤其适合低浓度 dsDNA 的捕获。

2. 荧光量子产率的突破性提升
   染料通过分子内电荷转移（ICT）机制，在结合 dsDNA 后荧光量子产率从 0.05 跃升至 0.82，实现160 倍以上的信号增强。这一特性使其在 10 pg/μL 的极低浓度下仍能产生可检测信号，比传统紫外吸光度法（A260）灵敏度高 500 倍。

3. 协同结合效应的链式放大
   首个染料分子结合后会诱导邻近 DNA 螺旋局部解旋，促进后续染料分子的连续结合，形成级联放大效应。这种特性使染料在低浓度区间（<50 ng/mL）仍保持严格线性关系（R2>0.999），而 SYBR Green I 在此区间常出现信号饱和。

二、检测性能的全面超越

1. 超高灵敏度与宽动态范围

   • 检测下限：10 pg/μL（比 PicoGreen 低 10 倍），可直接定量单细胞全基因组扩增产物（约 6 pg / 细胞）；

   • 线性范围：覆盖 10 pg/μL 至 100 ng/μL，且在 10 pg/μL~1 ng/μL 区间仍保持 R2>0.998 的线性关系，满足二代测序文库质检（如 10× Genomics 单细胞测序）的严格需求。

2. 抗干扰能力的技术突破

   • RNA 耐受：对 dsDNA 的亲和力是 RNA 的10 倍以上，当样本中 RNA 浓度为 dsDNA 的 50 倍时，检测偏差仍 < 5%；

   • 盐离子兼容性：在 2 M NaCl 或 50 mM EDTA 中，染料与 dsDNA 的结合效率无显著下降，可直接检测粗提核酸或含抗凝剂的全血样本（1:100 稀释）；

   • 蛋白质抑制：通过电荷优化设计，减少与带负电蛋白质的非特异性结合，在 2 mg/mL BSA 存在下，荧光信号变化 < 8%。

3. 光稳定性与抗淬灭性
   染料通过甲氧基取代基增强 π-π 堆积作用，在 365 nm 紫外光连续照射 30 分钟后，荧光衰减率 <12%，显著优于 PicoGreen（衰减> 20%）和 SYBR Green I（衰减 > 30%），适合长时间电泳或实时荧光监测。

三、复杂样本的直接分析能力

1. 临床样本的兼容性

   • FFPE 样本：在含 0.1% SDS 的裂解液中，可有效释放固定组织中的 DNA 并保持染料结合活性，回收率 > 90%，适用于肿瘤 FFPE 样本中 ctDNA 的定量；

   • 血清 / 血浆：无需酚 - 氯仿抽提，直接处理含抗凝剂的全血（1:100 稀释），10 分钟内完成检测，结果与 qPCR 法一致性达 98.7%。

2. 多重检测的无干扰性
   染料的发射光谱（471 nm）与常见荧光探针（如 FAM、JOE）无重叠，交叉干扰率 < 3%。例如，在多重 PCR 中可同时监测染料信号（dsDNA 总量）与 TaqMan 探针（如 VIC 标记的 KRAS 探针），实现突变等位基因的绝对定量。

四、技术创新的实际应用场景

1. 单细胞研究的精准支持
   在 10× Genomics 单细胞测序流程中，染料可直接定量单细胞全基因组扩增产物（约 10 pg/μL），检测结果与 qPCR 法的一致性达 98.7%，且操作时间缩短 40%。

2. 液态活检的突破性应用
   在肺癌患者的血浆样本中，可检测低至 20 pg/mL 的循环游离 DNA（cfDNA），结合 ddPCR 技术，突变检测灵敏度提升至 0.01%，显著优于传统 qPCR 法（灵敏度 0.1%）。

3. 基因编辑效率的快速评估
   在 CRISPR-Cas9 编辑后的细胞中，染料可同步定量基因组 DNA 浓度并结合 T7EI 酶切法，评估编辑效率（如插入 / 缺失突变）。实验显示，其检测结果与二代测序数据的相关性达 0.97。

五、用户体验的细节优化

1. 即用型缓冲体系的设计
   试剂盒提供预混的 Binding Buffer，含 Mg2?和 Tris-HCl（pH 8.0），可直接与样本混合，无需额外优化条件。例如，在质粒提取后，直接取 2 μL 上清液加入 200 μL 工作液，即可上机检测。

2. 仪器兼容性的扩展

   • 板式读数仪：支持 440-460 nm 激发 / 470-490 nm 发射，适配 BioTek、Tecan 等主流平台；

   • 便携式设备：与手持式荧光计（如 Quantus）兼容，适合野外或现场检测，如环境样本中微生物 DNA 的快速定量。

3. 储存稳定性的增强
   染料在 4℃避光条件下可稳定保存 24 个月，分装为单次用量（如 100 μL / 管）后，反复冻融 5 次仍保持 90% 以上活性，显著降低实验室的试剂损耗成本。

MarveBlue X-Green II dsDNA HS 试剂盒的荧光染料通过分子结构创新和检测性能优化，重新定义了高灵敏度 dsDNA 定量的行业标准。其在单细胞测序、液态活检和基因编辑等场景中的卓越表现，使其成为精准医学和分子生物学研究的核心工具。未来，随着近红外衍生物的开发，X-Green II 有望在活体成像和超微量检测领域开拓新的应用边界。

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