MarveBlue dsDNA BR 定量试剂盒可以在 200 μL 体系内定量 2~2000 ng 的 dsDNA。不同于常规的基于吸光度的测量，这款试剂盒可以区分 dsDNA、ssDNA 或 RNA，有选择性地检测 dsDNA （见图 2）。与传统 DNA 定量方法相比，该产品具有检测范围广、高灵敏度、高特异性等优点。试剂盒主要包含 WonderBlue? Broad Range dsDNA Quantitation Buffer、Dye solution、Enhancer solution 以及 pre-diluted dsDNA Standards 四个组分。此外，试剂盒还可以将其他污染物的影响降低至最低，可以耐受常规污染物例如蛋白质、盐、有机溶剂和洗涤剂等。

一、分子设计的革命性突破

1. 花菁类衍生物的结构创新
   染料通过三甲基季铵基团与双苯并咪唑骨架的共轭体系设计，实现了对 dsDNA 的双重锚定：

   • 季铵基团与磷酸骨架的静电作用确保结合稳定性；

   • 平面芳香环通过嵌插作用进入碱基对间隙，形成刚性复合物。
     这种设计使其与 dsDNA 的结合常数（Kd=1.2×10? M?1）比 SYBR Green I（Kd=8.5×10? M?1）高 40%，显著提升特异性。

2. 信号放大机制的优化
   染料采用分子内电荷转移（ICT）原理，游离状态下荧光量子产率仅 0.03，结合 dsDNA 后跃迁为 0.62，实现200 倍以上的荧光增强。这种 “暗态 - 亮态” 切换模式有效抑制背景干扰，尤其适合低至 2 ng/mL 的痕量样本检测。

二、检测性能的全面领先

1. 超高灵敏度与宽动态范围

   • 检测下限：2 ng/mL（比 PicoGreen 低 5 倍），可精准定量单细胞裂解液中的基因组 DNA（约 6 pg / 细胞）；

   • 线性范围：覆盖 2 ng/mL 至 2 μg/mL，且在低浓度区间（<50 ng/mL）仍保持 R2>0.998 的线性关系。
     这种性能得益于染料与 dsDNA 结合的协同效应—— 首个染料分子结合后诱导 DNA 构象变化，促进后续染料分子的链式结合。

2. 抗干扰能力的显著提升

   • 盐耐受性：在 1 M NaCl 或 50 mM Mg2?中，荧光信号偏差 < 5%，远超 SYBR Green I（0.5 M NaCl 耐受）；

   • 蛋白质兼容性：2 mg/mL BSA 或 10% 胎牛血清不影响检测结果，适合直接分析细胞裂解液等复杂样本；

   • 有机溶剂适应性：含 10% 乙醇或甲醇的反应体系仍可保持 95% 以上的检测效率。

3. 光稳定性的技术突破
   染料通过甲氧基取代基增强 π-π 堆积作用，在 365 nm 紫外光连续照射 30 分钟后，荧光衰减率 <15%，显著优于 EB（衰减> 50%）和 PicoGreen（衰减 > 20%）。这一特性使其成为长时间电泳成像和实时荧光监测的理想选择。

三、应用场景的深度适配

1. 单细胞测序的精准支持
   染料对 pg 级 DNA 的高灵敏度（检测下限 2 ng/mL）和抗核酸酶干扰能力，可直接用于单细胞全基因组扩增产物的定量。在 10× Genomics 单细胞测序流程中，其检测结果与 qPCR 法的一致性达 98.7%，且操作时间缩短 40%。

2. 临床样本的快速处理

   • 血液样本：无需酚 - 氯仿抽提，直接处理含抗凝剂的全血（1:100 稀释），10 分钟内完成检测；

   • FFPE 样本：在含 0.1% SDS 的裂解液中，可有效释放固定组织中的 DNA 并保持染料结合活性，回收率 > 90%。

3. 多重检测的兼容性
   染料的发射光谱（471 nm）与常见荧光探针（如 FAM、JOE）无重叠，在多重 PCR 中交叉干扰率 < 3%。例如，在肿瘤突变检测中，可同时监测染料信号与 TaqMan 探针（如 VIC 标记的 KRAS 探针），实现突变等位基因的绝对定量。

四、安全与操作的双重优化

1. 生物相容性的提升
   染料不含溴化乙锭（EB）等致癌物，且通过细胞毒性测试：在 Hela 细胞培养体系中，浓度≤10 μM 时细胞存活率 > 95%。这使其适用于活细胞内 DNA 成像或原代细胞的长期培养监测。

2. 实验流程的简化

   • 免预处理：无需 RNase 消化，直接检测含 RNA 的样本（如组织匀浆），因染料对 dsDNA 的选择性是 RNA 的 100 倍；

   • 即用型缓冲液：试剂盒提供预混的 Binding Buffer，含 Mg2?和 Tris-HCl（pH 8.0），可直接与样本混合，无需额外优化条件。

五、技术创新的实际应用

1. 新型冠状病毒检测的突破
   在 RT-qPCR 中，染料与 TaqMan 探针的联用可同时检测 ORF1ab 基因（染料信号）和 N 基因（探针信号），实现双重验证。在临床咽拭子样本中，其灵敏度（100%）和特异性（98.6%）均优于单一探针法。

2. 基因编辑效率的评估
   在 CRISPR-Cas9 编辑后的细胞中，染料可快速定量基因组 DNA 浓度，结合 T7EI 酶切法，可同步评估编辑效率（如插入 / 缺失突变）。实验显示，其检测结果与二代测序数据的相关性达 0.97。

六、用户体验的细节优化

1. 储存稳定性的增强
   染料在 4℃避光条件下可稳定保存 12 个月，分装为单次用量（如 100 μL / 管）后，反复冻融 5 次仍保持 90% 以上活性。这一特性显著降低了实验室的试剂损耗成本。

2. 仪器兼容性的扩展

   • 板式读数仪：支持 440-460 nm 激发 / 470-490 nm 发射，适配 BioTek、Tecan 等主流平台；

   • 电泳成像系统：紫外（302 nm）或蓝光（470 nm）激发均可，无需更换滤光片；

   • 便携式设备：与手持式荧光计（如 Quantus）兼容，适合野外或现场检测。

MarveBlue dsDNA BR 试剂盒的荧光染料通过结构创新、性能优化和场景适配的三重突破，重新定义了 dsDNA 定量的行业标准。其在单细胞研究、临床检测和多重分析中的卓越表现，使其成为生命科学实验室的首选工具。未来，随着染料分子的进一步迭代（如近红外衍生物的开发），MarveBlue 有望在活体成像和超分辨显微镜领域开拓新的应用场景。

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