QbtPro X-Green II dsDNA HS 定量试剂盒，荧光染料在科研中的特异性

2025-08-26

QbtPro X-Green II dsDNA HS 定量试剂盒是荧光检测 dsDNA 并进行定量的一种产品，这种检测方法非常灵敏，常用于分子生物学中 cDNA 文库的构建和亚克隆 DNA 片段的纯化。常规的 DNA 含量检测方法是在 260 nm 处测其吸光值。这种方法的主要缺点是核苷酸、单链核酸和蛋白质对信号的影响很大，并且还会受到核酸制备过程中污染物的干扰，无法区分 DNA 和 RNA，而且灵敏度低（5 μg/mL dsDNA 溶液 A260 = 0.1）。QbtPro X-Green II dsDNA HS 定量试剂盒检测方法简单方便，已成为生物制品残留 DNA 检测的标准。

Qbtest? X-Green II 只有与 dsDNA 结合后才发出荧光，并且荧光强度与 DNA 浓度成正比。QbtPro X-Green II dsDNA HS 定量试剂盒升级款检测浓度范围 10 pg/μL~100 ng/μL、检测质量范围 0.2~100 ng，且线性关系较好 (R2 > 0.99)。

一、结合机制的靶向性

X-Green II 的特异性源于其分子结构与 dsDNA 双螺旋的适配性。染料通过嵌入碱基对之间的疏水作用和静电吸引力与 dsDNA 结合，这种结合方式仅在 dsDNA 的刚性双螺旋结构中才能稳定发生。相比之下，ssDNA 或 RNA 的单链柔性结构无法形成稳定的染料嵌入位点，导致结合效率极低。例如，当 X-Green II 与 dsDNA 结合后，荧光信号强度会增强约 100 倍，而与 ssDNA 或 RNA 结合时荧光增幅不足 10 倍。

二、抗干扰能力突出

即使样本中存在高浓度的 RNA、蛋白质、盐离子或自由核苷酸，X-Green II 仍能保持对 dsDNA 的高选择性：

排除 RNA 干扰：X-Green II 对 dsDNA 的亲和力是 RNA 的10 倍以上。实验显示，当样本中 RNA 浓度为 dsDNA 的 50 倍时，检测结果偏差仍小于 5%。
耐受常见污染物：在含 1% SDS、50 mM EDTA 或 2 M NaCl 的环境中，染料与 dsDNA 的结合效率无显著下降。这一特性使其适用于粗提核酸或复杂生物样本（如细胞裂解液）的直接检测。
抑制非特异性结合：染料分子的电荷分布经过优化，可减少与带负电的蛋白质或脂质的静电吸附，进一步降低背景信号。

三、实验数据验证

线性关系与准确性：X-Green II 在10 pg/μL 至 100 ng/μL的宽浓度范围内（R2>0.99）表现出严格的线性响应，这一特性仅在染料与目标分子特异性结合时才能实现。
与传统方法的对比：传统紫外吸光度法（A260）无法区分 DNA 与 RNA，且易受游离核苷酸干扰。而 X-Green II 在含 100 μg/mL RNA 的样本中，对 dsDNA 的检测误差小于 3%，显著优于 A260 法。
复杂样本适用性：在含血清、细胞裂解物或病毒颗粒的实验中，X-Green II 的检测结果与 qPCR 法高度一致，证明其在真实生物环境中的可靠性。

四、与其他染料的差异化优势

与 SYBR Green I/II 等同类染料相比，X-Green II 的特异性进一步优化：

更高的 dsDNA 偏好性：SYBR Green II 对 RNA 的亲和力约为 dsDNA 的 1/3，而 X-Green II 通过分子修饰将这一比例降低至 1/10 以下。
更低的背景干扰：X-Green II 在游离状态下荧光本底极低，即使未结合的染料残留于样本中，也不会显著影响检测结果。

五、应用场景的针对性

由于其特异性，X-Green II 特别适用于以下场景：

微量 dsDNA 定量：如二代测序文库质检、病毒基因组残留检测等，可避免 RNA 或引物二聚体的误判。
复杂样本分析：如细胞转染后 dsDNA 的定量，或血清中游离 DNA 的检测，能有效排除蛋白质和 RNA 的干扰。
快速质控：在质粒提取或 PCR 产物纯化过程中，可直接通过荧光信号判断 dsDNA 的纯度和浓度，无需耗时的凝胶电泳。

六、稳定性与操作便捷性

X-Green II 的特异性还体现在其长期稳定性上。染料在 4℃避光条件下可保存 12 个月，且冻干制剂在室温下仍能稳定存放数周。配合 Qubit 等专用仪器使用时，操作流程仅需 5 分钟，进一步减少了人为误差对特异性的影响。

X-Green II 的特异性源于其分子结构与 dsDNA 的精准适配，结合实验验证的抗干扰能力和宽线性范围，使其成为目前最可靠的 dsDNA 定量工具之一。这种特性不仅确保了检测结果的准确性，还为复杂样本的快速分析提供了高效解决方案。

本文引用地址：https://www.med-life.cn/product/1296483.html

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