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PMA qPCR 活菌检测试剂盒（No Primer），荧光染料在科研领域中具有的优势及其价值

2025-08-13

产品货号：PR01015

产品品牌：Medlife

PMA qPCR 活菌检测试剂盒（No Primer） 是一种高亲和性的 DNA 结合染料，该染料本身具有微弱的荧光，与核酸结合后可以发出更为明亮的荧光。它尤其与双链 DNA 具有高亲和性。PMA qPCR 活菌检测试剂盒（No Primer） 不具有细胞膜渗透性，因此可选择性地修饰膜受损的死细胞的 DNA。PMA qPCR 活菌检测试剂盒（No Primer） 修饰的 DNA 经蓝光 (~464 nm) 光解后，PMA qPCR 活菌检测试剂盒（No Primer） 上的光反应性叠氮基转化为高反应性氮烯自由基，与 DNA 结合位点附近的任何烃部分反应形成稳定的共价氮碳键，从而导致永久性 DNA 修饰。该修饰过程会使 DNA 不溶，并使其在随后的基因组 DNA 提取过程中与细胞碎片一起丢失，进而阻碍死细胞中目标 DNA 的 PCR 扩增。残留在溶液中未结合的 PMA，在强光照射下与水分子反应分解成无交联活性的羟胺化合物，使羟胺不再能够共价结合 DNA，从而不影响 PCR 扩增。这个特性使得 PMA qPCR 活菌检测试剂盒（No Primer） 可以通过实时定量 PCR (qPCR) 的手段，检测多种样本类型包括：细菌、生物膜、酵母、真菌、病毒和真核细胞；与 qPCR、NGS、Sanger 测序 LAMP 技术相结合，广泛应用在食品和水安全和环境测试中。

一、PMA 染料：特异性区分死活细胞的核心工具

PMA（Propidium Monoazide）是该试剂盒的关键荧光染料，其独特的理化特性是实现活菌检测的基础：

  1. 膜通透性的选择性
  2. PMA 是一种亲脂性核酸染料，仅能穿透死亡细胞破损的细胞膜，而无法进入活细胞完整的细胞膜。这种选择性使其能精准靶向死细胞内的 DNA，而不干扰活细胞的核酸，从源头避免死细胞 DNA 对活菌检测的干扰（传统 qPCR 无法区分死活细胞，易因死细胞残留导致假阳性）。
  3. 光激活后与 DNA 不可逆交联
  4. 进入死细胞后，PMA 与 DNA 结合，经可见光（如蓝光）激活后，会与 DNA 发生共价交联，形成稳定的 PMA-DNA 复合物。这种交联会显著抑制死细胞 DNA 的 PCR 扩增（包括 qPCR 中的延伸步骤），确保 qPCR 扩增产物仅来源于活菌的 DNA，从根本上提高活菌检测的特异性。
  5. 低背景干扰
  6. PMA 本身的荧光信号较弱，与 DNA 结合后荧光强度虽增强，但经光激活交联后，其荧光特性稳定，且对 qPCR 体系中的 DNA 结合染料（如 SYBR Green I）的信号干扰极低，保证 qPCR 定量的准确性。

二、qPCR 荧光染料：高灵敏度与定量准确性的保障

试剂盒中 qPCR 体系的荧光染料（如 SYBR Green I）与 PMA 协同作用，进一步提升检测性能：

  1. 高灵敏度靶向活菌 DNA
  2. 经 PMA 处理后，死细胞 DNA 被抑制，qPCR 体系中的荧光染料仅与活菌 DNA 结合并发出信号。由于排除了死细胞的干扰，即使样本中活菌浓度极低（如 10 CFU/mL 以下），仍能通过荧光信号的累积实现精准检测，灵敏度远高于传统培养法（依赖活菌增殖，低浓度样本易漏检）。
  3. 实时定量与线性范围宽
  4. 荧光染料随 PCR 扩增动态发出信号，可通过 qPCR 仪实时监测活菌 DNA 的扩增曲线，结合标准曲线实现绝对定量（活菌数量）。其线性定量范围通常可达 101~10? CFU/mL，覆盖绝大多数环境样本、临床样本中活菌的浓度范围。
  5. 与 PCR 体系兼容性强
  6. 染料对 Taq 酶活性的抑制作用弱，且与 PMA 处理后的样本兼容性好，不会影响 PCR 扩增效率，保证了定量结果的可靠性。

三、“No Primer” 设计：适配多样本的通用性优势

试剂盒不含特异性引物，这一设计赋予荧光染料体系更强的灵活性：

  1. 适用于多种微生物检测
  2. 用户可根据目标菌（如细菌、真菌、病毒等）自行选择特异性引物，结合荧光染料体系，实现对不同类群活菌的检测。例如，检测食品中的沙门氏菌、环境中的大肠杆菌，或临床样本中的耐药菌等，均无需更换染料体系，通用性极强。
  3. 支持定制化研究需求
  4. 对于未明确引物序列的新发现微生物，或需要同时检测多种活菌（多重 qPCR）的场景，“No Primer” 设计允许用户自由搭配引物，荧光染料可兼容不同引物的扩增体系，满足个性化科研需求。

PMA qPCR 活菌检测试剂盒的荧光染料通过 “PMA 特异性标记死细胞 + qPCR 染料定量活菌 DNA” 的协同机制，解决了传统方法中 “死活细胞难区分、检测慢、灵敏度低” 的痛点。其优势尤其适用于：食品卫生检测（如快速筛查致病菌活菌）；环境监测（如水体 / 土壤中功能菌的活性分析）；临床诊断（如感染性疾病中活菌负荷的定量）；微生物生态学研究（如菌群活性动态追踪）。

综上，该体系的荧光染料以 “特异性、灵敏度、通用性” 为核心，为活菌检测提供了高效、可靠的技术支撑，是微生物学研究及应用领域的重要工具。

本文引用地址：https://www.med-life.cn/product/1296682.html

联系方式：4006087598

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