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SYBR Green qPCR Master Mix (2×) 是一种结合于所有 dsDNA 双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。SYBR Green qPCR Master Mix (2×) 与 dsDNA 结合荧光信号会增强 800~1000 倍，是一种常用的 qPCR 荧光染料。具有高灵敏度，信噪比高等优势，可应用于基因表达差异分析，基因芯片等。
一、按需释放机制：高灵敏度与低抑制性的完美平衡
EvaGreen 通过二聚体结构与构象转换机制实现 DNA 结合。在无 DNA 时，染料呈闭合环状无荧光状态；当遇到双链 DNA（dsDNA）时，构象转为开放线性并嵌入 DNA 小沟，释放强烈荧光。这种 “按需释放” 特性带来两大突破：
高浓度使用不抑制 PCR：可在饱和浓度下工作（远超 SYBR Green I 的使用浓度），显著增强信号强度，同时避免因染料不足导致的 “重分布” 现象（即染料从短片段迁移至长片段，干扰熔解曲线分析）。
兼容快速 PCR：对 Taq 酶活性抑制极低，支持缩短延伸时间（如 30 秒→10 秒），在保证扩增效率的同时，将 qPCR 总时长缩短 30% 以上。
二、HRM 分析的黄金搭档：单碱基差异的精准捕捉
在 HRM 实验中，EvaGreen 的饱和染色特性使其成为区分序列细微差异的利器：
单碱基突变检测：通过熔解曲线的形状和温度变化，可精准识别 SNP、插入 / 缺失突变及甲基化差异。
线粒体 DNA 直接定量：无需核基因参照即可定量线粒体 DNA，减少因内参选择引入的误差，特别适用于线粒体疾病研究。
复杂样本适应性：对富含 GC 的模板（如某些病毒基因组）或含抑制剂的临床样本（如血液、组织裂解液）仍能保持高分辨率，避免非特异性信号干扰。
三、稳定性与安全性：实验室操作的双重保障
化学稳定性卓越：在室温下可长期储存，反复冻融 20 次以上仍保持性能稳定；高温（95°C）处理 48 小时无降解，远优于易分解的 SYBR Green I。
生物安全性突出：细胞膜穿透性极弱，且经 Ames 实验验证无诱变性和细胞毒性，显著降低实验人员暴露风险。相比之下，SYBR Green I 具有较强的细胞膜渗透性，可能干扰细胞内 DNA 修复机制，甚至被列为环境污染物。
四、兼容性与多功能性：无缝融入现有实验体系
仪器通用性：激发 / 发射光谱（约 500 nm/530 nm）与 SYBR Green I 完全一致，无需调整 qPCR 仪的光学参数即可直接替换，兼容 Roche LightCycler 480、Bio-Rad CFX 等主流设备。
多场景应用拓展：除 HRM 和 qPCR 外，EvaGreen 还可用于数字 PCR（ddPCR）、等温扩增（如 LAMP）、毛细管凝胶电泳等，且 PCR 产物可直接电泳检测（无需额外染色）。例如，其在 ddPCR 中表现出低背景荧光和高信噪比，支持对痕量 DNA 的绝对定量。
五、实验效率与结果可靠性的全面提升
预混体系简化流程：SatGreen Master Mix 已包含 EvaGreen 染料、热启动酶、缓冲液等成分，只需加入引物和模板即可反应，减少移液步骤和污染风险。
质控实时化：荧光信号随 PCR 进程动态变化，可实时监测扩增效率，及时发现模板降解或引物二聚体等问题，避免后续实验资源浪费。
数据重复性优异：优化的缓冲体系和染料稳定性，使不同批次实验的 Ct 值变异系数（CV）低于 5%，熔解曲线的 Tm 值差异小于 0.2°C。
实际应用场景与科研价值
基因分型与突变筛查：在肿瘤突变检测、遗传病诊断中，EvaGreen 可快速筛选未知突变，结合二代测序进一步验证。
药物研发与耐药性分析：通过 HRM 监测病原体耐药相关基因突变，助力抗生素敏感性评估。
表观遗传学研究：甲基化特异性 PCR（MSP）后直接进行熔解曲线分析，简化甲基化状态判断流程。
综上，EvaGreen 荧光染料凭借其饱和染色机制、高分辨率、稳定性和安全性，成为 HRM 分析的标杆性染料。SatGreen Master Mix 与之结合，不仅实现了实验流程的高效整合，更通过精准的熔解曲线分析和可靠的数据输出，为基因研究、分子诊断等领域提供了强大工具。
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